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嘌呤霉素(Puromycin)是来源于Streptomyces alboniger的一种氨基核苷类抗生素，常用于筛选通过质粒转染/转化、病毒感染等方法能表达pac基因(puror)的真核或原核多克隆或单克隆细胞。嘌呤霉素不仅用于稳定细胞株的筛选，也用于稳定细胞株的维持。

嘌呤霉素的特点是快速作用于细胞，一般2天内可以杀死99%的不表达pac基因的细胞。

在革兰氏阳性菌、动物或昆虫细胞中，嘌呤霉素通过抑制蛋白质合成而抑制或杀死细胞。其作用机制为嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3'末端的类似物，能够与核糖体的A位点结合并掺入到延伸的肽链中。嘌呤霉素与A位点结合后，不会参与随后的任何反应，从而导致蛋白质合成的提前终止并释放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

本产品为10mg/ml包装，配制在20mM HEPES(pH7.4)溶液中，经0.22μm滤膜过滤除菌，可以直接用于细胞培养。

• 推荐工作浓度：推荐的作用于哺乳动物细胞的嘌呤霉素浓度一般为1～10μg/ml，但最佳工作浓度需要通过剂量反应曲线来确定。
  表1.部分常见哺乳动物细胞的推荐工作浓度表
  

  细胞名称	细胞类型	嘌呤霉素浓度(μg/mL)
  A549	Lung cancer	1～2
  B16	Mouse melanocytes	1～2
  ES cell	Human embryonic stem cells	0.5～5
  H1299	Non-small cell lung carcinoma	1～3
  HEK293	Human embryonic kidney	0.5～3
  HeLa	Human cervical cancer	1～2
  HepG2	Human hepatocellular carcinoma	0.5～2
  HT1080	Human fibrosarcoma	0.5～2
  MCF-7	Human breast cancer	0.5～2
  MDA-MB-231	Human breast cancer	0.5～5
  MEF	Mouse fibroblasts	1～5

  
  
• 嘌呤霉素剂量反应曲线的确定(以shRNA转染或者慢病毒感染为例)
  嘌呤霉素的有效筛选浓度跟细胞类型、生长状态、细胞密度、细胞代谢及细胞所处细胞周期等因素相关。为了筛选到稳定表达的shRNA或感染病毒的细胞株，确定杀死未转染/感染细胞的最低浓度嘌呤霉素非常重要。对于初次使用的细胞，一般需要通过实验来确定适合自身实验体系的剂量反应曲线。
  
  • 第一天：24孔板中以5～8×10⁴ cells/孔的密度接种细胞，接种够量的孔以便进行后续的剂量梯度实验。细胞培养箱内培养过夜。
    
  • 第二天：在培养过夜后的细胞中更换新鲜配制的筛选培养基，该筛选培养基为含不同浓度嘌呤霉素的新鲜培养基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等)，更换培养基后在细胞培养箱中继续培养。
    
  • 第三天后：由于嘌呤霉素可以快速作用于细胞，一般2天内可以杀死99%的未表达pac基因的细胞，所以在加嘌呤霉素后的1～2天就可以进行观察细胞存活率，从而确定有效杀死正常细胞的药物最低浓度。如果细胞耐药性比较强，需要每日观察，一般4～10天内即可确定嘌呤霉素的最低浓度。
• 哺乳动物稳定表达细胞株的筛选
  转染含有pac基因的质粒或者感染含有该基因的病毒后，即可筛选稳定表达株。
  
  • 细胞转染或感染48小时后，将细胞置于含有适当浓度嘌呤霉素的新鲜培养基中培养，此为处理组。
    注意：当细胞处于分裂活跃期时，抗生素作用最明显。细胞过于密集，抗生素产生的效力会明显下降，所以细胞的密度最好不超过25%。建议同时做一个正常细胞的对照组。转染或感染48小时后，如果细胞过密也可以消化后重新接种细胞，培养过夜后即可进行嘌呤霉素筛选。
    
  • 每隔2～3天，更换含有嘌呤霉素的培养基。
    
  • 筛选7天后，对照组正常细胞应该100%死亡，处理组中存活的细胞为表达pac基因的细胞。然后根据实验目的进行多克隆或单克隆细胞的筛选。注意：每日进行细胞生长状态的观察。嘌呤霉素的筛选至少需要24小时，有效浓度嘌呤霉素的筛选周期一般在2～10天。
    
  • 待细胞可以稳定生长后，嘌呤霉素的浓度可以减半用于后续的培养。在得到稳定表达细胞株后，一般建议嘌呤霉素也须持续加入，并2～3天更换含有嘌呤霉素的新鲜培养液。