产品货号:
KL221235
中文名称:
TRAP专用细胞裂解液
英文名称:
Lysis Buffer for TRAP
产品规格:
10mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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TRAP专用细胞裂解液通常用于端粒酶重复片段扩增(TRAP)实验中,以提取细胞中的端粒酶。其作用是裂解细胞,释放出细胞内的端粒酶,以便后续进行端粒酶活性的检测。
组分 | 规格 |
TRAP专用细胞裂解液 | 10mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
端粒酶的组成成分中有RNA,极容易被降解,因此,提取端粒酶应该跟提取RNA一样,尽量在低温条件下快速操作、最好使用本公司的固相表面RNase清除剂预先清洁试验台面等容易有RNase污染的地方。
- 对冷冻的实体组织:将50~100mg在-80℃冷冻的组织放装有液氮的研钵中研磨成粉末,再转移到预冷的玻璃匀浆器中,加入200μL预冷的TRAP专用细胞裂解液,温和手动匀浆6次后冰浴30分钟,每间隔5分钟涡旋振荡一次,然后直接进入第4步操作。
- 为保证裂解效果,可在显微镜下观察确保大部分细胞已经裂解。如果组织样品不足50~100mg,可以按比例降低TRAP专用细胞裂解液用量。在-20℃保存的实体组织放置2个月后就失去端粒酶活性,而在-80℃保存的实体组织放置数年还有端粒酶活性。
- 对新鲜的培养细胞和组织:用自备的预冷PBS洗涤1E6个经过胰酶处理的细胞或50~100mg经过胰酶处理的新鲜组织,3000g 4℃离心5分钟,弃上清,细胞沉淀可以直接使用,也可以放-80℃保存后续使用。在细胞或组织沉淀中加入200μL预冷的TRAP专用细胞裂解液,轻柔吹打3次悬浮细胞或组织。
对新鲜细胞:涡旋振荡10秒后置冰浴30分钟,每间隔5分钟涡旋振荡一次。
对新鲜组织:在冰上用玻璃匀浆器轻柔匀浆后冰浴30分钟,每间隔5分钟涡旋振荡一次。如果细胞不足1E6或50~100mg,按比例降低TRAP专用细胞裂解液用量。 - 14000g 4℃离心20分钟,收集160μL上清,留40μL不取。
- 取部分上清液用自备BCA蛋白浓度测定试剂盒测定总蛋白浓度。
- 测出各样品的蛋白浓度后,用TRAP专用细胞裂解液将各样品的蛋白浓度调成3μg/μL,然后分装合适的量到离心管中,将实验所需的数量放冰上待用,其余的放-80℃长期保存(可存放一年)。此步所得样本称为端粒酶待测样本。
- 对每个样本,一次实验需要两管,一管用于测定端粒酶活性,一管用作该待测样本的热灭活阴性对照。制备方式是每个样本取一管端粒酶待测样本,95℃处理10分钟灭活端粒酶,放冰上待用。没有用完的可放-80℃长期保存(可存放一年)供下次使用。
- 按常规操作进行后续的端粒酶检测实验。
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