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2.5M 3-AT溶液(过滤除菌)图片
产品货号:
KD1707
中文名称:
2.5M 3-AT溶液(过滤除菌)
英文名称:
2.5M 3-AT Solution
产品规格:
5×5mL|100mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

保存:-20℃

保存条件:-20℃储存,有效期24个月。
包装内容:
产品简介:
HIS2作为报告基因时,会有一定程度的泄漏性表达,出现背景过高的现象,一般称作自激活。这时可以在筛选培养基中加入适量的HIS2竞争性抑制剂3-AT(3-amino-1,2,4-triazole),以降低背景;或者增加一个筛选标记Ade来进行更加严格的筛选。加入的3-AT浓度过高,蛋白间比较弱的相互作用也可能被抑制,因此需要筛选确定3-AT的最适浓度。
Biorab的3-AT溶液为经过过滤除菌的即用型母液,用于酵母杂交实验抑制本底表达,用以准确筛选出蛋白互作引发的His的报告基因的表达。
使用方法:
1.计算所需平板的数量,计算配置培养基体积;
2.设置3-AT的浓度梯度(建议10~50mM的浓度范围设3~5个梯度,常用浓度约30mM);
3.灭菌筛选培养基,待培养基冷却到55℃左右,加入3-AT母液,摇匀后倒板;
4.标记每个平板的3-AT浓度,超净台冷却凝胶后,按单位面积单个克隆计算培养物浓度,涂板;
5.28~30℃培养3~5天,筛选出最佳3-AT浓度,用于后期互做筛选。
注意:
1.理想情况10mM浓度的3-AT平板会有少量生长,20mM浓度的3-AT不能或极少生长。如果在80mM浓度的3-AT平板上生长酵母,说明自激活活性太高,不能用于双杂交筛选。
2.诱饵蛋白能够单独激活报告基因的表达,该蛋白如果是具有转录激活域一个转录因子,需要去掉转录激活结构域。如果不是转录因子但仍具有较强的转录激活活性,需要将诱饵蛋白具有激活活性的区域去除,但这样操作有可能影响蛋白间的互作。
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