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本制品是一种利用荧光探针BalBoxiProbe O13进行活性氧检测的试剂盒。O13探针可自由透过细菌细胞膜进入细胞内，并被细菌细胞内的ROS氧化，产生红色荧光物质，并稳定存在于细菌胞内。根据细菌细胞中红色荧光的产生和强弱，可以判断细菌细胞ROS含量的变化情况。除了本红色荧光检测的试剂盒以外，百奥莱博还提供细菌活性氧检测试剂盒(绿色荧光)。

在激发波长510nm，发射波长610nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、荧光显微镜、激光共聚焦显微镜、流式细胞仪等可以检测荧光强度的设备，可以方便测定荧光情况，从而测定细菌胞内活性氧水平。

• 使用方便：可用激光共聚焦显微镜直接观察、荧光分光光度计、荧光酶标仪或流式细胞仪检测；
  
• 背景低，灵敏度高；
  
• 线性范围宽，使用方便。

活性氧(ROS)包括过氧化氢（H2O2）、羟基自由基（·OH）、单线态氧（1O2）、一氧化氮（NO）、超氧阴离子(·O2-)、过氧化自由基(ROO·)、过氧羟自由基（HOO·）及其下游产物过氧化物过氧亚硝基阴离子（ONOO-）、ClO-和羟化物等，参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程。

• 可以根据需要分装后冻存。
  
• 探针为DMSO溶液，在2～8℃时是固体状态，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 仪器准备：激光共聚焦显微镜或荧光分光光度计或酶标仪或流式细胞仪、离心机、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：PBS缓冲液或者HBSS
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套、黑色96孔板

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 荧光探针标记后，一定要洗净残余的未进入细胞内的探针，否则会导致背景较高。
  
• 探针标记完毕并洗净残余探针后，可以进行激发波长的扫描和发射波长的扫描，以确认探针的标记情况是否正常。
  
• 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。
  
• O13在光照和空气中易被氧化，注意避光密封保存。
  
• 对不同的细菌样本，应选择合适的孵育时间和浓度，以观察ROS的变化。应根据预实验情况调整染色浓度和时间。
  
• 必须使用荧光检测专用的黑色96孔板。

• O13探针工作液配制：
  
  • 根据样本数量，用纯水将探针稀释液B进行10倍稀释。
    
  • 根据样本数量，用10倍稀释过的探针稀释液B将探针进行1000倍稀释。即配成染色工作液。
• O13探针标记：
  
  • 准备1mL新鲜待测菌液。
    
  • 将待测细菌样本离心收集菌体。
    
  • 用PBS洗涤菌体2～3次。离心收集菌体沉淀。
    
  • 用500μL染色工作液重悬菌体。
    
  • 在37℃避光孵育30～45分钟。
    
  • 孵育结束后，离心收集菌体。
    
  • 用PBS清洗细胞一次。离心收集菌体。
    
  • 用500μL PBS重悬菌体。充分混匀。
    
  • 取200μL加入荧光检测用96孔板。
    
  • 置于酶标仪中，后于激发波长为510nm、发射波长610nm检测荧光强度。