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活性氮(reactive nitrogen species，RNS)是指NO与包括活性氧在内的化合物相互作用，生成一系列包括ONOO?及其质子形式过氧亚硝酸(HOONO)等具有高度氧化活性的自由基和硝基类化合物，这些与活性氧相对应的以NO为中心的衍生物称为活性氮。活性氮主要包括氮氧化物一氧化氮(NO)和二氧化氮(NO2)、过氧化亚硝酰阴离子(ONOO?)、亚硝酰氢(HNO)、亚硝酸根离子(NO2-)和氨等。
血清活性氮检测试剂盒是一种利用新型荧光探针O52进行血清中活性氮检测的试剂盒。本试剂盒中的O52 RNS探针为绿色荧光的活性氮探针，具有488/516nm的最大激发/发射波长。
O52 RNS探针在血清中活性氮存在的条件下，被氧化生成绿色荧光物质，绿色荧光强度与血清内活性氮水平成正比，检测O52产物的荧光就可以知道血清内活性氮的水平。
在激发波长488nm，发射波长516nm附近，使用荧光分光光度计、荧光酶标仪、等检测O52产物荧光，从而测定血清内活性氮水平。
本试剂盒可以用于各种动物血清样本的检测。
本试剂盒只可以用于新鲜血清样本的活性氮检测，长期冻存的血清样本的活性氮可能已经失去，不能再检测到，因此用于长期冻存的血清样本的活性氮检测时请根据需要自己测试选择。
以每个血清样本100μL计，本试剂盒小包装可以染色100个样本。


● 使用方便：可用荧光分光光度计、荧光酶标仪检测；
● 背景低，灵敏度高；
● 线性范围宽，使用方便。

组份	100T	200T
活性氮O52探针	100μL	100μL×2
说明书	1份	1份

-20℃避光保存，有效期6个月。
注：
● 染料短期2周内可2～8℃保存。染料长期不用可-20℃保存。避免反复冻融。
● 探针液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
● 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 试剂拆封后请尽快使用完！
● 本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。


荧光光度计或荧光酶标仪，激发波长488nm，发射波长516±10nm，或者按照FITC荧光检测条件检测。，纯水/PBS，HBSS(不含酚红)，离心机


● 螺旋盖微量管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● O52染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
● 使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
● 尽量缩短探针标记后到测定所用的时间，以减少各种可能的误差。


试剂准备：
根据样本数量，用纯水将O52探针10倍稀释。充分混匀，备用。
注：
● 不可以一次性将探针全部稀释。
● 现配现用。
● 也可以不稀释探针，直接在待检测血清样品中加入1μL探针，但是需要用好的移液器和吸头，注意操作过程，保证探针有效的加入了样品中，并充分混匀。
样本检测：
1.在96孔板中加入100μL新鲜血清样本、10μL O52探针，用移液器吹打，使之充分混匀。
注：
● 注意选择合适的96孔板，荧光检测需要使用专用的黑色板。
2.在37℃避光孵育15～30分钟。
3.置于荧光光度计或酶标仪中，后于激发波长为488nm、发射波长530nm检测荧光强度。
注：
● 荧光强度强则活性氮含量高。
● 可以用实验中对照血清样本的荧光强度值为基准，待测模型组血清的荧光强度值占对照血清的百分比来比较活性氮程度差异。
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