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本试剂盒采用BalBcellProbe P02溶酶体pH值荧光探针检测溶酶体pH值的变化。BalBcellProbe P02主要用于哺乳动物细胞的研究。在有溶酶体pH变化的细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中也可应用。实际检测时推荐使用的激发波长为380～405nm左右，发射波长为525～550nm。可以使用激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测溶酶体pH值的变化。

BalBcellProbe P02是pH敏感的荧光染料，在采用黄绿色发射光检测时，其荧光强度随着pH值降低而增强，反之碱性条件下变低，从而BalBcellProbeP02可被用于监测溶酶体pH变化。

BalBcellProbe P02是适合溶酶体pH检测的荧光探针，它是一种可以穿透细胞膜的荧光染料，是一种嗜酸性的荧光染料，它在较低的pH下发出强烈的黄绿色荧光。P02进入细胞后，会产生特异性的溶酶体聚集。产生的荧光物质最大激发波长为385nm，最大发射波长为540nm，其在不同的pH值条件下发射的荧光强度不同，从而可以反映溶酶体pH值的变化情况。

溶酶体pH（Intracellular pH，pHi）是酶活性和细胞功能的重要生理决定因素，所有蛋白质都依赖于严格调节的pH值以维持其结构和功能。质子-去质子化可以指示生物表面的电荷，并且是许多代谢反应中的组成部分。细胞已经开发出多种机制来保持pHi的窄范围，以响应pH值的细胞内和细胞外波动。

市面上现有的pH探针不适用于研究酸性细胞器如溶酶体，内涵体，精子和顶体，因为它们的荧光在较低pH下显著降低。另外，市面上现有的pH探针不能选择性地定位于酸性细胞器中。

• 探针液长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
  
• 探针液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。
  
• 探针A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 试剂拆封后请尽快使用完！

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  使用前，先将本品取出回温至室温，并对其进行简短离心使DMSO溶液集中于管底。
  
• pH探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• BalBcellProbe P02探针容易受潮，受潮后稳定性较差，注意干燥保存。
  
• 吸取BalBcellProbe P02探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
  
• 未使用完的BalBcellProbe P02探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。
  
• BalBcellProbe P02探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
  
• 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
  
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先根据不同的实验要求、细胞类型、细胞的膜通透性等进行优化，确定最佳条件。以下方法仅供参考。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 染色后立即进行分析。
  
• 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液，Pluronic F127可以帮助BalBcellProbe P02更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BalBcellProbe P02溶液。
  
• 本试剂盒主要用于溶酶体pH值变化的定性检测。但是在一定pH值范围内荧光强度与溶酶体pH有良好的线性关系，从而可以换算出溶酶体的pH值的具体数据。如果需要制备标准曲线换算溶酶体pH值数值，可以联系百奥莱博技术邮箱bjbalb@126.com索取参考方法。

• 染色工作液的配制：
  根据样品数，用探针稀释液将P02探针进行10倍稀释，然后再用HBSS缓冲液稀释BalBcellProbe P02溶液50倍～100倍，配制成BalBcellProbeTM P02染色工作液。
  
• 将BalBcellProbe P02染色工作液加入已处理好的细胞，在37℃孵育1～5分钟。
  
• 然后用该细胞进行荧光溶酶体pH变化情况检测。
  激发波长360～405nm，发射波长525～550nm。