产品货号：
HR8227
中文名称：
细胞内Ca2+钙离子检测试剂盒(F04法)
英文名称：
产品规格：
50T|100T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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钙离子检测试剂盒采用F04细胞内钙离子浓度荧光探针检测钙离子浓度水平的变化。钙离子浓度变化是活细胞接受外界刺激后产生级联反应的重要信息传递方式，因此细胞内钙离子检测是信号转导G蛋白偶联受体(GPCR)介导的相关药物筛选以及其他相关实验中非常重要的一种研究手段。
F04 具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的F04新产物，从而被滞留在细胞内。F04 游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60 至100倍，最大激发波长为494nm，最大发射波长为 516nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为 515～530nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
F04荧光探针采用可见光激发，与传统的紫外光激发的荧光探针相比，仪器的适用范围更广泛，具有更强的探针吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化，从而降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。
储存条件：-20℃避光保存。避免反复冻融。
有效期：六个月。
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
● 激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪/荧光酶标仪等●离心机● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● Hanks balanced salt solution(HBSS)● PBS
使用方法：
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
● F04探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
● F04探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
● 未使用完的F04探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
● F04探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
● F04 融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
●可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液(可选步骤)，Pluronic F127可以帮助F04更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存F04溶液。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
1．染色工作液的配制：
用 HBSS 稀释F04溶液400倍-4000倍，配制成F04染色工作液。
【注】：
● 推荐该探针加载终浓度在400-4000倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。
● 为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
● 工作液需现配现用，避免反复冻存。
2．收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
【注】：
● 没有HBSS也可以用PBS洗细胞。
●培养基血清中的酯酶会降解F04，从而降低F04进入细胞的效果。所以加工作液之前必须洗涤细胞，尽量去除培养基残留。
3．离心去上清后，将F04染色工作液加入细胞，在37℃孵育20-60分钟。
【注】：
● 关于孵育的时间，首次预实验不能确定，建议先孵育30分钟。
● 根据荧光效果：如果太强，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。
●染色工作液加入量以覆盖细胞即可。
4．用HBSS 洗涤细胞2-3次。
5．用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。
6．然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长488-495nm，发射波长516nm。
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F04 具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的F04新产物，从而被滞留在细胞内。F04 游离配体几乎是非荧光性的，其荧光不会随钙离子浓度升高而增强。但是，当它与细胞内钙离子结合后可以产生较强的荧光，荧光会增加60 至100倍，最大激发波长为494nm，最大发射波长为 516nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为 515～530nm。可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内钙离子浓度的变化。
F04荧光探针采用可见光激发，与传统的紫外光激发的荧光探针相比，仪器的适用范围更广泛，具有更强的探针吸收性能，使得更低浓度的探针即可成功检测Ca2+变化，从而降低了对活细胞的光毒性，检测敏感度更高。
储存条件：-20℃避光保存。避免反复冻融。
有效期：六个月。
※ ※ ※ 使用前请仔细阅读产品说明书 ※ ※ ※
使用限制：本试剂仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
产品更新：我公司会更新或升级产品，以优化和增强其使用性能，产品说明书会进行相应的版本更新。使用产品时，请参照随产品附带的说明书，不要参照网上下载的说明书，可能是不同的版本。需要最新电子版说明书时可以在收到产品后发邮件索取。
使用安全：使用时需要合适的实验室外套，一次性手套。避免皮肤或粘膜与试剂接触。如果试剂不小心接触皮肤或眼睛，应立即用水冲洗。
试剂盒以外自备仪器和试剂耗材：
仪器
● 激光共聚焦/荧光显微镜/流式细胞仪/荧光酶标仪等●离心机● 移液器●冰箱●冰盒
耗材
●离心管● 吸头
试剂
● Hanks balanced salt solution(HBSS)● PBS
使用方法：
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
● 钙离子染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
● F04探针容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。从冰箱取出后，请确认在干燥的环境放至室温后再开封。
● F04探针母液时要用干燥的新吸头，不能使用含水的吸头。
● 未使用完的F04探针母液请拧紧螺旋盖，避免受潮失效。母液遇水极易分解，如果长期不用，建议根据每次使用量分装保存，用封口膜封口，并用铝箔纸包裹，放在一个密闭性能好的塑料袋中，并放入一包干燥剂，在≤-20℃密封避光保存。
● F04探针工作液含水，配制后不可以长期保存，须现配现用。
● F04 融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
●可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液(可选步骤)，Pluronic F127可以帮助F04更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存F04溶液。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、钙离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。
1．染色工作液的配制：
用 HBSS 稀释F04溶液400倍-4000倍，配制成F04染色工作液。
【注】：
● 推荐该探针加载终浓度在400-4000倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。
● 为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
● 工作液需现配现用，避免反复冻存。
2．收集培养好的待测细胞样本，用HBSS洗涤细胞3次。
【注】：
● 没有HBSS也可以用PBS洗细胞。
●培养基血清中的酯酶会降解F04，从而降低F04进入细胞的效果。所以加工作液之前必须洗涤细胞，尽量去除培养基残留。
3．离心去上清后，将F04染色工作液加入细胞，在37℃孵育20-60分钟。
【注】：
● 关于孵育的时间，首次预实验不能确定，建议先孵育30分钟。
● 根据荧光效果：如果太强，适当缩短时间；如果荧光强度太弱，适当延长时间。
●染色工作液加入量以覆盖细胞即可。
4．用HBSS 洗涤细胞2-3次。
5．用HBSS重悬细胞。在37℃下再继续孵育20-40分钟。
6．然后用该细胞进行荧光钙离子检测。激发波长488-495nm，发射波长516nm。
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