产品货号：
HR0959
中文名称：
线粒体膜通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒
英文名称：
产品规格：
100T
发货周期：
1～3天
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CA1线粒体膜通透性转换孔Mitochondrial Permeability Transition Pore(MPTP)检测试剂盒采用CA1 粒体膜通透性转换孔荧光探针检线粒体膜通透性转换孔的激活情况。
线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeablity transition pore，mPTP)，又称线粒体巨型通道(magachannel)，是存在于线粒体内外膜之间的一组蛋白复合体，由多种蛋白质复合组成，是存在于线粒体内外膜之间的一种非特异性高导电性通道，其分子组成尚未完全清楚，多数学者认为其是由外膜的电压依赖的阴离子通道(VDAC)、内膜的腺嘌呤核苷转位蛋白(ANT)以及亲环素D等组成。线粒体通透性转换孔(mPTP)可能参与了细胞死亡过程中线粒体成分的释放，在细胞的生存、凋亡中扮演着重要角色，它涉及缺血/再灌注、肿瘤、衰老、神经变性等多个领域。
正常的细胞线粒体内膜可维持正常的线粒体电位梯度以保证细胞呼吸作用及能量供应，随着Ca2+的摄入和释放，一种低电导渗透性转换孔在张开和闭合中来回切换。当细胞发生凋亡时和病理性死亡时，线粒体膜电位转换孔渗透性发生改变，Ca2+的过载，线粒体谷胱甘肽的氧化，活性氧水平的升高，包括后继细胞色素C的释放，线粒体膜电位下降等都会导致线粒体渗透性转换孔的激活。
CA1线粒体膜通透性转换孔Mitochondrial Permeability Transition Pore(MPTP)检测试剂盒检测原理其是：首先通过被动运输加载CA1探针，CA1探针是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，能够轻易穿透活细胞膜，被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子CA，从而被滞留在细胞内，使胞质包括线粒体发出强绿色荧光。加入CA荧光探针的淬灭剂后，来自胞质的荧光被淬灭剂淬灭，仅留下线粒体内的荧光。作为对照，可将细胞加载CA1和CA荧光探针淬灭剂的同时，对其用Ca2+通透剂处理，从而使细胞加载更多的Ca2+，引起线粒体通透性转换孔的激活从而使线粒体荧光淬灭。
本试剂盒按每个样品500μl计算，可供200-1000次检测。
CA 最大激发波长495nm，最大发射波长515nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为510～530nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞内mPTP的变化。
储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。
注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● CA1探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● Hanks balanced salt solution(HBSS)或HEPES或PBS
● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪或激光共聚焦显微镜
使用方法：
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● CA1 容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。
1．染色工作液的配制：
1.1 1×MPTP染色buffer 配制：用纯水10倍稀释10×MPTP染色buffer,配制1×MPTP染色buffer
1.2 CA1染色工作液配制：根据样品数量用1×MPTP染色buffer 稀释CA1探针500倍，配制成CA1染色工作液，充分混匀。
2．细胞染色
2.1 将样品细胞制备成单细胞悬液，使其密度为1×106细胞/ml。
【注】
①用于加Ca2+通透剂的对照样品的缓冲液必须含有Ca2+；
② CA1探针加载时不能含有血清；
③细胞必须为单细胞悬液。
2.2 按照500μl每管将细胞悬液等分，每个样品等分成3 份，并记录编号。
【注】
后续染色顺序：1 号管仅含CA1探针，2 号管含CA1探针和淬灭剂，3 号管含CA1探针，淬灭剂和通透剂，另外准备一管不加试剂的细胞样品用于相应的仪器设置。
2.3 向上述每个样品的3 管中分别加入3μl CA1探针工作液并混匀。
【注】
推荐该探针加载浓度在200-400倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
2.4 向2 号、3 号管中加入5μl 淬灭剂，并混匀。
2.5 向3 号管中加入5μl 通透剂，并混匀。
2.6在37℃避光孵育15分钟。
2.7 向每管中加入3ml 1×MPTP染色buffer，离心收集细胞。
【注】
此步可去除多余染料以及可能引起荧光淬灭的试剂。
2.8用400μl 同时可用于流式检测的合适的缓冲液重悬细胞。
【注】
如果需要，也可进行进一步染色。如用标记的Annexin V检测磷酯酰丝氨酸易位(HR0399 Anneexin V细胞凋亡检测试剂盒)；用PI检测细胞活力；或者用M11探针检测线粒体活力等。注意整个过程均需避光操作。
2.9染色后，将样品置于冰上，1小时内进行流式分析。
3．细胞检测
用不含试剂的细胞样品进行相应的仪器设置。用流式488 激发器进行荧光分析，CA1探针最大激发波长495nm，最大发射波长515nm。
1 号管-仅含CA1探针：线粒体和胞浆有荧光，荧光信号较强；
2 号管-含CA1探针和淬灭剂：仅线粒体呈现荧光，荧光强度居中；
3 号管-含CA1探针，淬灭剂和通透剂：线粒体和胞浆荧光均被淬灭，荧光信号最弱。
2 号管和3 号管荧光信号的变化说明线粒体通透性转换孔被不断的激活。
相关搜索：线粒体膜通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒
线粒体膜通透性转换孔(mitochondrial permeablity transition pore，mPTP)，又称线粒体巨型通道(magachannel)，是存在于线粒体内外膜之间的一组蛋白复合体，由多种蛋白质复合组成，是存在于线粒体内外膜之间的一种非特异性高导电性通道，其分子组成尚未完全清楚，多数学者认为其是由外膜的电压依赖的阴离子通道(VDAC)、内膜的腺嘌呤核苷转位蛋白(ANT)以及亲环素D等组成。线粒体通透性转换孔(mPTP)可能参与了细胞死亡过程中线粒体成分的释放，在细胞的生存、凋亡中扮演着重要角色，它涉及缺血/再灌注、肿瘤、衰老、神经变性等多个领域。
正常的细胞线粒体内膜可维持正常的线粒体电位梯度以保证细胞呼吸作用及能量供应，随着Ca2+的摄入和释放，一种低电导渗透性转换孔在张开和闭合中来回切换。当细胞发生凋亡时和病理性死亡时，线粒体膜电位转换孔渗透性发生改变，Ca2+的过载，线粒体谷胱甘肽的氧化，活性氧水平的升高，包括后继细胞色素C的释放，线粒体膜电位下降等都会导致线粒体渗透性转换孔的激活。
CA1线粒体膜通透性转换孔Mitochondrial Permeability Transition Pore(MPTP)检测试剂盒检测原理其是：首先通过被动运输加载CA1探针，CA1探针是一种对活细胞进行荧光标记的细胞染色试剂，能够轻易穿透活细胞膜，被细胞内的酯酶剪切形成膜非渗透性的极性分子CA，从而被滞留在细胞内，使胞质包括线粒体发出强绿色荧光。加入CA荧光探针的淬灭剂后，来自胞质的荧光被淬灭剂淬灭，仅留下线粒体内的荧光。作为对照，可将细胞加载CA1和CA荧光探针淬灭剂的同时，对其用Ca2+通透剂处理，从而使细胞加载更多的Ca2+，引起线粒体通透性转换孔的激活从而使线粒体荧光淬灭。
本试剂盒按每个样品500μl计算，可供200-1000次检测。
CA 最大激发波长495nm，最大发射波长515nm。实际检测时推荐使用的激发波长为488nm 左右，发射波长为510～530nm。可以使用流式细胞仪或激光共聚焦显微镜检测细胞内mPTP的变化。
储存条件：-20℃避光保存。
有效期：一年。
注意事项：
●本试剂盒仅供科学研究使用，不可用于诊断或治疗。
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失。
● 样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。
● 最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。
● 避免皮肤或粘膜与试剂接触。
● CA1探针为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
●荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
试剂盒以外自备试剂和仪器：
● Hanks balanced salt solution(HBSS)或HEPES或PBS
● 移液器及吸头 ● 流式细胞仪或激光共聚焦显微镜
使用方法：
使用注意事项：
● 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
●细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。
●染色后立即进行分析。
●标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。以下方法仅供参考。
● CA1 容易受潮，稳定性较差，注意干燥保存。
1．染色工作液的配制：
1.1 1×MPTP染色buffer 配制：用纯水10倍稀释10×MPTP染色buffer,配制1×MPTP染色buffer
1.2 CA1染色工作液配制：根据样品数量用1×MPTP染色buffer 稀释CA1探针500倍，配制成CA1染色工作液，充分混匀。
2．细胞染色
2.1 将样品细胞制备成单细胞悬液，使其密度为1×106细胞/ml。
【注】
①用于加Ca2+通透剂的对照样品的缓冲液必须含有Ca2+；
② CA1探针加载时不能含有血清；
③细胞必须为单细胞悬液。
2.2 按照500μl每管将细胞悬液等分，每个样品等分成3 份，并记录编号。
【注】
后续染色顺序：1 号管仅含CA1探针，2 号管含CA1探针和淬灭剂，3 号管含CA1探针，淬灭剂和通透剂，另外准备一管不加试剂的细胞样品用于相应的仪器设置。
2.3 向上述每个样品的3 管中分别加入3μl CA1探针工作液并混匀。
【注】
推荐该探针加载浓度在200-400倍稀释，具体的使用浓度需根据实验要求进行优化。为了避免过度加载造成细胞毒性，建议在取得有效结果的基础上尽量使用最低探针浓度。
2.4 向2 号、3 号管中加入5μl 淬灭剂，并混匀。
2.5 向3 号管中加入5μl 通透剂，并混匀。
2.6在37℃避光孵育15分钟。
2.7 向每管中加入3ml 1×MPTP染色buffer，离心收集细胞。
【注】
此步可去除多余染料以及可能引起荧光淬灭的试剂。
2.8用400μl 同时可用于流式检测的合适的缓冲液重悬细胞。
【注】
如果需要，也可进行进一步染色。如用标记的Annexin V检测磷酯酰丝氨酸易位(HR0399 Anneexin V细胞凋亡检测试剂盒)；用PI检测细胞活力；或者用M11探针检测线粒体活力等。注意整个过程均需避光操作。
2.9染色后，将样品置于冰上，1小时内进行流式分析。
3．细胞检测
用不含试剂的细胞样品进行相应的仪器设置。用流式488 激发器进行荧光分析，CA1探针最大激发波长495nm，最大发射波长515nm。
1 号管-仅含CA1探针：线粒体和胞浆有荧光，荧光信号较强；
2 号管-含CA1探针和淬灭剂：仅线粒体呈现荧光，荧光强度居中；
3 号管-含CA1探针，淬灭剂和通透剂：线粒体和胞浆荧光均被淬灭，荧光信号最弱。
2 号管和3 号管荧光信号的变化说明线粒体通透性转换孔被不断的激活。
相关搜索：线粒体膜通透性转换孔(MPTP)检测试剂盒