产品目录

本试剂盒是利用TMA-DPH测定膜流动性的荧光探针法，它在脂蛋白及其类似系统的单分子层动力学研究中特别有用。TMA-DPH呈圆柱形，会发生基于按长分子轴线平行排列而产生发射荧光向偶极跃迁，它们对由于周围脂类相互作用而导致的再定位非常敏感。它们广泛地被用于旋转运动研究中的荧光偏振分析。

TMA-DPH本身不发荧光，当与细胞膜结合后，荧光大大增强，TMA-DPH与可用的细胞膜表面成比例，其荧光强度对由胞吐造成的质膜表面积的增加敏感。因此，其荧光强度对于导致膜表面积净变化的生理过程敏感，使其成为用于监测诸如细胞体积和胞吐变化的事件的优异探针。TMA-DPH荧光偏振测量可与视频显微镜组合，以在大脂质体和单细胞中提供磷脂顺序的空间分辨图像。

传统的DPH探针可以进入细胞内，百奥莱博试剂盒膜示踪荧光探针TMA-DPH不能进入细胞内，因此TMA-DPH探针较DPH探针能更准确的反应膜脂流动性，本探针的最大激发波长为355nm，最大发射波长为430nm。

膜的流动性是生物膜结构的基本特征之一，主要指膜脂肪酸链部分及膜蛋白的运动状态。膜脂类分子在相变温度以上条件下主要有侧向扩散、旋转、左右摇摆、伸缩振荡、翻转及异化运动等方式。膜蛋白的运动方式大体分为侧向及旋转运动，主要受脂质双分子层的影响。脂肪酸不饱和键含量和链的长度明显影响着膜脂流动性，不饱和键的存在会降低膜脂分子间排列的有序性，从而增加膜的流动性，短链能减低脂肪酸链尾部相互作用，在相变温度下，不易于凝集，此外，脂肪酸烃链围绕C- C键由全反式构型到歪扭(CAUCHE)的旋转异构运动，也可使流动性加大。

生物膜适宜的流动性是体现生物膜正常功能的必要条件，在一定范围内，膜流动性增加，有利于膜中酶分子的扩散和旋转运动，使酶活性增加。一些载体蛋白分子的运动性也取决于膜中脂类分子的流动性。研究发现肿瘤对化疗药物产生的耐药性主要与细胞膜P糖蛋白过度表达谷胱甘肽及其相关酶系活性改变有关，也有许多研究表明耐药细胞膜流动性较亲代敏感细胞明显增加。另有实验研究发现腹水癌细胞的恶性程度随着膜流动性的增加而增加，白血病及转移的肿瘤细胞的膜流动性远远高于非转移细胞。因此，对敏感及耐药的肿瘤细胞膜流动性的监测有着重要的意义。

膜流动性的测定方法主要有荧光探针标记，电子自旋共振以及差示扫描量热法，x线衍射，棱碰共振等。

• 染料长期不用可以-20℃保存。避免反复冻融。
  
• 染色液A为DMSO溶液，冬季气温较低时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热融解，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
  
• 可以用手捂住使其融解或37℃短时间水浴。吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。

• 仪器准备：含有偏振检测装置的设备(荧光分光光度计/酶标仪等)、离心机、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：PBS缓冲液、HBSS
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 染色液为DMSO溶液，冬季气温较低时在室温时为凝固状态，极易粘附在管壁、吸头壁。注意需要加热溶解，吸头也需要放在培养箱预热，否者容易再次凝固在吸头内壁产生损耗。
  
• 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
  
• 染色后立即进行分析。
  
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。
  
• 必须使用细胞荧光检测专用的黑色细胞培养板。
  
• 以下步骤仅供参考。请根据实际实验方案设计或者参考文献实验。

• 染色工作液的配制：用稀释液稀释TMA-DPH探针1000倍～10000倍，配制成TMA-DPH染色工作液。
  
• 用染色工作液重悬细胞，在37℃孵育15～30分钟。
  
• 用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS洗涤细胞1次。
  
• 用pH7.4 HBSS或20mM HEPES或PBS重悬细胞
  
• 用该细胞进行检测。激发波长355nm，发射波长430nm。