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本试剂盒采用BalBcellProbe H01细胞内氯离子浓度荧光探针检测氯离子浓度水平的变化。H01氯离子荧光探针采用荧光淬灭法检测氯离子水平。

BalBcellProbe H01具有极高的细胞渗透性，经过简单孵育即可实现细胞加载。穿透细胞膜进入细胞后被细胞内的酯酶剪切形成不易透过细胞膜的H01新产物，从而被滞留在细胞内。H01游离配体大激发波长约为351nm，最大发射波长约为460nm。当氯离子浓度升高时，H01的荧光强度随着氯离子浓度的增加而成比例地降低。

H01的荧光强度几乎不受pH变化的影响。H01的检测灵敏度比SPQ更高，并且荧光效果也比SPQ要好一些，可以使用荧光显微镜、酶标仪、激光共聚焦显微镜或流式细胞仪检测细胞内氯离子浓度的变化。

本试剂盒用于细胞内氯离子浓度变化情况的定性检测，需要细胞内氯离子浓度定量检测试剂盒产品请选择细胞内氯离子检测试剂盒。

• 仪器准备：激光共聚焦/荧光显微镜//光度计/流式细胞仪、离心机、移液器、冰箱、冰盒
  
• 试剂准备：PBS缓冲液、HBSS
  
• 耗材准备：离心管、吸头、一次性手套

• 螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体收集至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 探针为了便于观察防止误操作导致损失，在试剂盒中时是采用透明管包装，收到后可以离心移入干燥黑色避光密封管或者用铝箔包裹避光。
  
• 荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。
  
• 细胞处理需要小心操作，尽量避免人为的损伤细胞。
  
• 染色后立即进行分析。
  
• BalBcellProbe H01融解后离心至管底部再打开螺旋盖，防止开盖时损失。
  
• 可以在染色溶液中加入等体积的20% Pluronic F127溶液（可选步骤），Pluronic F127可以帮助BalBcellProbe H01更快进入细胞，不建议在Pluronic F127中长期保存BalBcellProbe H01溶液。
  
• 标记的条件因细胞种类而异，根据不同样本的实际染色结果做相应调整，在每次实验前，请先确定最佳条件。在正式实验前先摸索一下细胞量、氯离子荧光探针的终浓度、培养时间等，找到最佳实验条件。以下方法仅供参考。

• 染色工作液的配制：用HEPES缓冲液稀释BalBcellProbe H01溶液20倍（每100μL缓冲液中加入5μL染色液母液），配制成BalBcellProbe H01染色工作液。
  
• 收集培养好的待测细胞样本，用PBS或HBSS洗涤细胞3次。
  
• 离心去上清后，将BalBcellProbe H01染色工作液加入细胞，在37℃避光孵育30～60分钟。
  
• 用HBSS洗涤细胞3～5次。
  
• 用HBSS重悬细胞。
  
• 然后用该细胞进行荧光氯离子检测。激发波长351nm，发射波长460nm。