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本试剂盒提供了配制EMSA PAGE凝胶所需的各种试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制不同浓度的EMSA PAGE凝胶(即聚丙烯酰胺凝胶)，适用于EMSA试剂盒、化学发光法EMSA试剂盒、生物素标记RNA探针EMSA检测试剂盒等EMSA实验中EMSA凝胶的配制。

• 凝胶聚合催化剂用水配制成10%溶液后，应当分装成后-20℃保存，通常半年内有效。同时应尽量减少室温存放时间，以防失效。
  
• TEMED Substitute易挥发，使用后请盖紧瓶盖。另外凝胶凝聚的速度和温度及光照关系密切，可通过适当调节凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，控制在不同的室内环境下凝胶凝聚的速度。
  
• TEMED Substitute易燃，有腐蚀性，操作时请小心，并注意有效防护以避免直接接触人体或腐蚀其他物品。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 准备制备凝胶的模具。可以使用常规的制备蛋白电泳凝胶的模具。最好选择可以灌制较薄凝胶的模具(如0.75mm厚度)，以便于干胶、转膜等后续操作。为获到更好的条带分离效果，可以选择可灌制较大EMSA凝胶的模具。制胶前必须把制胶模具冲洗干净，需特别注意不能有SDS残留。
  
• 10%凝胶聚合催化剂的配制：例如称取0.1g凝胶聚合催化剂，用蒸馏水溶解，并定容至1mL，即为10%凝胶聚合催化剂。
  
• 配制一块常用EMSA PAGE胶(胶板宽度为10厘米)所需凝胶溶液体积：0.75mm厚度凝胶约5mL；1mm厚度凝胶约7mL；1.5mm厚度凝胶约10mL。均含约0.5mL的余量。
  
• 根据目的蛋白的分子量大小选择合适的凝胶浓度，并根据下表配制凝胶：
  

  成分	配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(mL)
  4%胶	10	20	30	40	50
  5×TBE Buffer	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  超纯水	7.6	15.2	22.8	30.4	38.0
  40% Acr-Bis (39:1)	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  80% Glycerol	0.313	0.625	0.938	1.250	1.563
  10%凝胶聚合催化剂	0.075	0.150	0.225	0.300	0.375
  TEMED Substitute	0.005	0.010	0.015	0.020	0.025
  成分	配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(mL)
  4.5%胶	10	20	30	40	50
  5×TBE Buffer	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  超纯水	7.5	15.0	22.4	29.9	37.4
  40% Acr-Bis (39:1)	1.1	2.3	3.4	4.5	5.6
  80% Glycerol	0.313	0.625	0.938	1.250	1.563
  10%凝胶聚合催化剂	0.075	0.150	0.225	0.300	0.375
  TEMED Substitute	0.005	0.010	0.015	0.020	0.025
  成分	配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(mL)
  5%胶	10	20	30	40	50
  5×TBE Buffer	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  超纯水	7.4	14.7	22.1	29.4	36.8
  40% Acr-Bis (39:1)	1.3	2.5	3.8	5.0	6.3
  80% Glycerol	0.313	0.625	0.938	1.250	1.563
  10%凝胶聚合催化剂	0.075	0.150	0.225	0.300	0.375
  TEMED Substitute	0.005	0.010	0.015	0.020	0.025
  成分	配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(mL)
  5.5%胶	10	20	30	40	50
  5×TBE Buffer	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  超纯水	7.2	14.5	21.7	28.9	36.2
  40% Acr-Bis (39:1)	1.4	2.8	4.1	5.5	6.9
  80% Glycerol	0.313	0.625	0.938	1.250	1.563
  10%凝胶聚合催化剂	0.075	0.150	0.225	0.300	0.375
  TEMED Substitute	0.005	0.010	0.015	0.020	0.025
  成分	配制不同体积EMSA PAGE凝胶所需各成分的体积(mL)
  6%胶	10	20	30	40	50
  5×TBE Buffer	1.0	2.0	3.0	4.0	5.0
  超纯水	7.1	14.2	21.3	28.4	35.5
  40% Acr-Bis (39:1)	1.5	3.0	4.5	6.0	7.5
  80% Glycerol	0.313	0.625	0.938	1.250	1.563
  10%凝胶聚合催化剂	0.075	0.150	0.225	0.300	0.375
  TEMED Substitute	0.005	0.010	0.015	0.020	0.025

  • 按照上述顺序依次加入各种试剂，加入TEMED Substitute前先混匀，加入TEMED Substitute后立即混匀，并马上加入到制胶的模具中。避免产生气泡，并加上梳齿。如果发现非常容易形成气泡，可以把一块制胶的玻璃板进行硅烷化处理。
    
  • 通常10～30分钟内胶会凝固。具体的凝固时间和温度及光照有关，上表中10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的正常推荐用量是室温为25℃时的推荐用量。为达到与25℃时相近的凝固时间，当室温低于25℃时，可以适当增加10%凝胶聚合催化剂和TEMED Substitute的用量，例如20℃时建议使用正常推荐用量的1.5倍，15℃时建议使用正常推荐用量的2倍。
• EMSA实验步骤可参考EMSA试剂盒或化学发光法EMSA试剂盒。