凝胶DNA回收试剂盒

产品货号：

SN0021

中文名称：

凝胶DNA回收试剂盒

英文名称：

ColPure Gel Purification Kit

产品规格：

50T|200T

发货周期：

1～3天

产品价格：

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简要说明：

本试剂盒适用于从琼脂糖凝胶中回收多至10μg DNA（80bp～10kb），回收率可达65～85%。琼脂糖凝胶在高离序盐中（Buffer GN）溶解后，DNA片段选择性吸附于离心柱内的硅基质膜上。回收后的DNA纯度高，并能保持片段完整性和高生物学活性，可直接用于测序、连接、PCR扩增、体外转录等分子生物学实验。

产品特点：

快速：胶块无需称重，操作简便。
高效：回收效率高，获得的目的DNA纯度高。
适用性广：一盒两用，可用于DNA片段凝胶回收及PCR产物直接回收等。

适用范围：
本试剂盒适用于PCR产物直接回收、DNA片段的凝胶回收、酶切产物的凝胶回收等。

产品组成：

组分	50T	200T
Buffer GN（黄色）	28mL	110mL
Buffer W1	24mL	75mL
Elution Buffer	15mL	25mL
吸附柱EC	50套	200套

保存：室温，有效期1年。

注意事项：
1.Buffer W1使用前加入指定量的无水乙醇，各溶液使用后请及时将盖子拧紧。
2.若回收凝胶中的DNA片段，电泳时应使用新的电泳缓冲液，以免影响电泳和回收效果。
3.建议使用高质量的琼脂糖，以免其中杂质影响下游连接等实验。
4.Buffer GN中含刺激性溶液，操作时要戴乳胶手套和眼镜。
5.回收产物可通过琼脂糖电泳或分光光度计检测是否回收成功。使用分光光度计时，若使用Elution Buffer进行洗脱，建议使用Elution Buffer进行校准。

使用方法：
一、PCR产物直接回

按照PCR产物原液∶Buffer GN＝1∶3的比例加入Buffer GN（不少于150μL）后吸打混匀（如：在1.5mL离心管中，50μL PCR原液加入150μL Buffer GN后吹打混匀）。
直接进入步骤4。

二、从琼脂糖凝胶中回收

在365nm长波紫外灯下，用干净刀片将目的条带切下，尽量切除不含目的DNA条带，得到凝胶体积越小越好（切胶时，为避免紫外照射时间过长对DNA造成损伤，建议快速切胶）。
将含有目的DNA条带的凝胶放入2mL离心管中，加入500μL的Buffer GN（若胶块过大，适当添加Buffer GN至溶液呈淡黄色）。
65℃水浴4～6min，每2～3min上下颠倒混匀一次至凝胶完全融化，溶液呈淡黄色。
将溶液转入吸附柱EC中，12000×g离心1min，弃废液，将吸附柱EC放回空收集管。
在吸附柱EC中加入600μL Buffer W1（请先检查是否已加入指定体积的无水乙醇），12000×g离心1min，弃废液。
如果回收的DNA是用于克隆实验或直接测序等，建议Buffer W1加入后静置2～5min再离心。
重复步骤5一次。
将吸附柱EC放回空收集管中，12000×g离心2min。
取出吸附柱，置于干净的1.5mL离心管中，室温开盖静置2min，在吸附膜的中间部位加35～50μL Elution Buffer（60～65℃预热Elution Buffer效果更好），室温放置2min，12000×g离心2min。如需较多量DNA，可将得到的溶液重新转入吸附柱中，离心2min。
洗脱体积越大，洗脱得率越高。若需得到较高浓度的DNA，可以适当减少洗脱体积，但最小体积应不少于25μL，体积过小会降低DNA洗脱得率，降低产量。洗脱液的pH值对于洗脱效率有很大影响。若后续做测序，需使用ddH2O洗脱，保证pH值在7.0～8.5范围内，pH值低于7.0会降低洗脱效率。DNA产物应保存在-20℃以防DNA降解。

常见问题：

DNA回收率低？
- 琼脂糖凝胶未完全溶化。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，溶胶时多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留。
- 胶块过大造成溶胶后溶液PH较高，吸附效率低。若胶块过大，适当添加Buffer GN至溶液呈淡黄色。
- 试剂准备有误。Buffer W1需按照瓶身标示加入指定体积的无水乙醇。
- 洗脱效率低。将Elution Buffer预热至60～65℃，并进行二次洗脱。
纯化后的DNA下游结果不理想？
- 盐离子残留。确保用Buffer W1洗脱两次，此外沿吸附柱管壁四周加入Buffer W1，或加入Buffer W1后颠倒混匀2～3次有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐离子。
- 琼脂糖残留。尽可能切除不含目的片段的琼脂糖，多次上下颠倒使凝胶充分溶化，确保无固体琼脂糖残留。

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