产品货号：
RFT332
中文名称：
尿素PAGE RNA电泳试剂盒
英文名称：
RNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
产品规格：
60T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂，用户只需自备制胶器具和蒸馏水，即可配制各种浓度的PAGE胶，使用方便。
核酸尿素PAGE电泳是研究寡核苷酸和RNA电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸或RNA片段，理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。
| 组分 | 规格 | 保存 |
| RNA核酸染料 | 0.5mL | 4℃ |
| RNase-free水 | 100mL | |
| 40% PAA(29:1,RNase-free) | 100mL | |
| TEMED | 0.5mL | 4℃，避光 |
| 10×TBE(RNase-free) | 500mL | RT |
| 尿素(电泳级) | 220g | |
| APS干粉 | 0.5g | |
| 2×RNA上样缓冲液 (尿素变性胶，RNase-free) | 1mL | -20℃ |
保存：按标签指示条件保存，有效期一年。
按照每次制备7mL 8%凝胶（大小10×8cm，1mm厚度）计算，试剂盒可使用至少60次。
10% APS配制：将0.5g APS干粉溶于5mL RNase-free水中，彻底溶解后分装，1mL/支，-20℃备存，每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间，以防失效。10% APS在4℃有效期为一周，-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长，应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
一、制备凝胶
1．参照凝胶模具说明书，装配好凝胶模具。
2．分离胶配制：根据表格一，将不同体积的成分混合，漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
表一：TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL，适用于厚度1.0mm小板胶)
| RNA长度 | 最佳凝胶浓度 | 尿素 | 40% PAA(29:1) | 10×TBE | RNase-free水 | 10% APS | TEMED |
| 200～1000nt | 5% | 2.1g | 0.625mL | 0.5mL | 至5mL | 50μL | 5μL |
| 50～400nt | 8% | 1mL | |||||
| 30～300nt | 10% | 1.25mL | |||||
| 40～200nt | 12% | 1.5mL | |||||
| 10～150nt | 15% | 1.875mL | |||||
| 6～100nt | 20% | 2.5mL |
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
表二：TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL，适用于1.0mm厚度胶)
| 尿素 | 40% PAA(29:1) | 10×TBE | RNase-free水 | 10% APS | TEMED |
| 0.84g | 0.2mL | 0.2mL | 至2mL | 20μL | 2μL |
- 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时，聚合较快；冬天气温低时，聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
二、电泳
- 预电泳：拔出梳子，用1×TBE缓冲液彻底冲洗加样孔2～3次，去除残余的尿素。电泳槽内外加入适量1×TBE缓冲液稳压200 V预电泳30分钟。
- 试剂盒配套的5×TBE缓冲液和RNase-free水仅够配制凝胶用，1×TBE电泳缓冲液原料和RNase-free水请自己准备，配方如下：
终浓度 顺序 原料 1L 5L 89mM 1 Tris碱[MW121.14] 10.8g 54g 2mM 2 EDTA 2Na·2H2O[MW：372.24] 0.744g 3.72g 89 MM 3 硼酸[MW：61.83] 5.5g 27.5g 4 RNase-free水最后定容至 1L 5L 最后pH在8.2～8.3之间，可以不用调节pH，记录每批pH。
- 试剂盒配套的5×TBE缓冲液和RNase-free水仅够配制凝胶用，1×TBE电泳缓冲液原料和RNase-free水请自己准备，配方如下：
- 取3～5μL样品，加入等体积2×RNA上样缓冲液，70℃处理5分钟后立即冰浴，上样。
- 连接电源线，打开电源开关，按照以下条件电泳。
恒电压 起始电流 结束电流 电泳时间 适用条件 推荐电压 200V 15～20mA/板胶 8～15mA/板胶 50+min 最佳电压，最优的分辨率 - 根据下表溴酚蓝指示前沿位置判断条带位置，取出凝胶进行后续实验。
变性胶浓度 溴酚蓝 二甲苯菁 5% 35nt 130nt 8% 19nt 75nt 10% 15nt 55nt 12% 12nt 55nt 15% 10nt 52nt 12% 5nt 50nt
三、染色
- 染色液配制：取一合适的容器，加入100mL 1×TBE，随后加入10μL RNA核酸染料混匀。
- 染色：取下凝胶放入染色液中，常温下摇床轻轻地摇动凝胶染色，最佳的染胶时间为15～20分钟，这取决于凝胶的厚度、聚丙烯酰胺的浓度和RNA的长短。凝胶越厚或聚丙烯酰胺的浓度越高，染色所需要的时间就越长。
- 染色溶液至少可重复使用2～3次。如果不立即再用的话，建议将用过的染色溶液冷藏避光保存。
- 观察：紫外灯下观察条带。
15% TBE尿素胶
20% T3.3C TBE-Urea PAGE
电泳条件：1×TBE恒压200V 16～8mA 75min
染色：RealGood Red后染30min
上样量：16～40nt RNA上样量1μg
单链RNA Ladder(15～50nt)上样量：5μL
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