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20bp DNA ladder(20~500bp)图片
产品货号:
RFT312
中文名称:
20bp DNA ladder(20~500bp)
英文名称:
20bp DNA marker(20-500bp)
产品规格:
250μL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是由13条带状双链DNA条带组成的精准定量Marker,适用于聚丙烯酰胺凝胶电泳中DNA条带大小和含量的分析。13条带的大小分别为20、40、60、80、100、120、140、160、180、200、300、400、500bp。其中100bp和200bp条带为加亮带,含量为100ng/5μL,其余条带浓度为50ng/5μL。




本制品为双链DNA Marker,适用于非变性的PAGE电泳和琼脂糖凝胶电泳,不适用于尿素PAGE电泳。由于片段较小,如使用琼脂糖分离,建议使用高分辨率琼脂糖凝胶电泳分离。


组分规格
20bp DNA ladder250μL
6×Native-PAGE DNA上样缓冲液1mL
6×DualColor DNA loading buffer1mL

保存:4℃,有效期6个月。


按照每次上样5μL计算,250μL的本制品可以使用50次。


一、TBE-PAGE凝胶分离:
  • 制备凝胶步骤:
    • 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
    • 按照表一将不同体积的成分在小烧杯或试管中混合;最后加入10%APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
      • 20bp DNA ladder适用于配制20%TBE-PAGE胶。
    • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于mini-gel,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm或距梳齿约0.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1-2cm的无水乙醇,使凝胶表面保持平整。
    • 静置10~20分钟,待分离胶和乙醇层之间出现一个清晰的界面后,说明凝胶已聚合
      表一:TBE-PAGE分离胶配方表(总体积5mL,适用于1mm厚度小板胶)
      最佳DNA分离范围凝胶浓度灭菌水30% PAA(29:1)5×TBE10% APSTEMED
      70~450bp6%3mL1mL1mL50μL5μL
      60~460bp8%2.66mL1.34mL
      50~300bp10%2.33mL1.67mL
      40~200bp12%2mL2mL
      25~150bp15%0.5mL2.5mL
      5~100bp20%0.66mL3.34mL
    • 去除覆盖在分离胶上的乙醇;按照表二将不同体积成分在一个小烧杯或试管中混合;最后加入10%过硫酸铵和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
      表二:TBE-PAGE 4%浓缩配方表(总体积1.5mL,适用于1mm厚度小板胶)
      凝胶浓度灭菌水30% PAA(29:1)5×TBE10% APSTEMED
      4%1mL200μL300μL20μL2μL
    • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达前玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
    • 静置30~60分钟,等待浓缩胶聚合。
      注:凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
  • 电泳:
    • 将凝胶板固定在电泳装置上,往上槽和下槽中加入1×TBE电泳液,1mL吸头冲洗加样孔1~2次。
    • 取待测样品,加入相应体积6×Native PAGE DNA上样缓冲液,如5μL样品加1μL上样缓冲液,短暂离心后取5~10μL上样。20bp DNA ladder 1mm厚10齿梳子上样5μL,其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。
    • 连接电源线,打开电源开关。200V稳压电泳。至二甲苯菁指示前沿到达凝胶三分之二位置时结束电泳(此时溴酚蓝指示前沿已经跑出凝胶,不可见)。
      TBE-PAGE电泳
      恒电压起始电流结束电流电泳时间
      200 V20-25 mA/板胶10-15 mA/板胶70+min
      20bp DNA ladder
  • 染色:
    • 漂洗:玻璃板上拆下凝胶后,适量蒸馏水漂洗3~5分钟。
    • 染色液配制:
      TBE-PAGE胶可以使用EB或RealGood类染料后染染色,以下程序用RealGood Red核酸染料进行染色。即用型染色液配制:
      成分用量
      1×TBE100mL
      RealGood Red核酸染料20μL

    • 染色和观察:
      凝胶浸泡于即用型染色液中,常温避光摇床40~60rpm染色30分钟。紫外光下观察。
      20bp DNA ladder(20~500bp)


二、琼脂糖凝胶分离:
  • 琼脂糖凝胶制备:
    由于片段较小,建议选用高分辨率琼脂糖制胶。以下步骤以制备50mL 3%凝胶为例:
    称取1.5g琼脂糖于玻璃三角瓶中,加入50mL 1×TAE,5μL RealGood Red核酸染料或其他核酸染料(如EB,GoldView),混匀,盖好瓶盖,微波炉中火加热至沸腾,轻摇混匀,重复1~2次至琼脂糖完全溶解,无可见颗粒。倒入制胶容器中,插好梳子,常温凝固30~50分钟至凝胶完全凝固。
  • 电泳:
    取待测样品,加入相应体积6×DualColor DNA loading buffer,如10μL样品加2μL上样缓冲液,短暂离心后取5~10μL上样。20bp DNA ladder 1mm厚10齿梳子上样5μL,其余梳齿和厚度凝胶适量调整上样量。
    建议电泳条件:凝胶浓度为3%,电泳电压8-10 v/cm(单位电压指电泳槽阴阳极之间的距离电压,如阴极阳极之间的距离为20cm,可以用160-200 V电压进行稳压电泳),待溴酚蓝指示前沿距离凝胶末端2cm时终止电泳,电泳时间35~40分钟。
    注:3%琼脂糖TAE电泳中,溴酚蓝大小约为20bp,二甲苯菁大小约200bp。
  • 紫外灯下观察条带:
    注:使用EB或Goldview染料时,由于染料本身带正电荷较多,随着电泳时间的延长,染料会向阴极聚集,导致小片段核酸结合的染料含量降低,会出现小片段的DNA片段紫外灯下亮度变弱或不可见。此时可以将胶浸泡于含有染料的1×TAE缓冲液中染色15~20分钟即可看到小片段。
  • 实验示例:
    20bp DNA ladder(20~500bp)

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