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DNA尿素PAGE电泳试剂盒图片
产品货号:
RFT203
中文名称:
DNA尿素PAGE电泳试剂盒
英文名称:
DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
产品规格:
60次
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本试剂盒包含凝胶制备及电泳所需的全部试剂,用户只需自备制胶器具和蒸馏水,即可配制各种浓度的PAGE胶,使用方便。


DNA尿素PAGE电泳是研究寡核苷酸电泳的重要研究手段。可以检测2-500碱基的寡核苷酸片段,理论上可以分辨出相差一个核苷酸的片段。


名称规格保存条件
40% PAA(29:1)100mL4℃
10×TBE500mLRT
尿素(电泳级)220gRT
APS(干粉)5mLRT(配制后-20℃贮存)
TEMED0.5mL4℃,避光
2×TBE尿素上样缓冲液(尿素变性胶)1mL4℃



本试剂盒配胶具体数量与凝胶浓度和凝胶厚度有关。按照每次制备10%凝胶(10×8cm,1mm厚度)计算,试剂盒可使用至少60次。


一、制备凝胶
10% APS配制-5mL:将0.5g APS干粉溶于5mL灭菌水中,彻底溶解后分装,1mL/支,-20℃备存,每次取一管使用。10% APS应尽量减少室温存放时间,以防失效。10% APS在4℃有效期为一周,-20℃有效期6个月。若发现凝胶聚合时间延长,应考虑更换使用-20℃保存的10% APS。
  • 参照凝胶模具说明书,装配好凝胶模具。
  • 分离胶配制:根据表格一,将不同体积的成分混合,漩涡搅拌至尿素彻底溶解。
    表一.TBE-尿素PAGE分离胶配方表(总体积5mL,适用于厚度1.0mm小板胶)
    单链DNA长度最佳凝胶浓度尿素40%PAA(29:1)10×TBE补水至10%APSTEMED
    200~1000nt5%2.1g0.625mL0.5mL5mL50μL5μL
    50~400nt8%1mL
    40~350nt10%1.25mL
    30~300nt12%1.5mL
    10~150nt15%1.875mL
    8~120nt20%2.5mL
  • 在凝胶模具中灌入适量分离胶溶液(对于8×10cm凝胶,凝胶液加至约距前玻璃板顶端1.5cm即可),然后在分离胶溶液上轻轻覆盖一层1~2cm的水层,使凝胶表面保持平整。
  • 静置10~20分钟,待分离胶和水层之间出现一个清晰的界面后,说明分离胶已聚合。
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。
  • 去除覆盖在分离胶上的水层,用滤纸吸干水分。
  • 按照表二将不同体积成分在一个小烧杯中混匀;加入10% APS和TEMED,轻轻搅拌使其混匀,避免产生气泡。
    表二.TBE-尿素PAGE 4%浓缩配方表(总体积2mL,适用于1.0mm厚度胶)
    凝胶浓度尿素40%PAA(29:1)10×TBE灭菌水10%APSTEMED
    4%0.84g0.2mL0.2mL至2mL20μL2μL
  • 将浓缩胶溶液加至分离胶的上面,直至凝胶溶液到达短玻璃板的顶端;将梳子插入凝胶内,避免产生气泡。
  • 静置30~60分钟,等待浓缩胶聚合。
    • 凝胶的聚合时间与环境温度有关。夏天温度较高时,聚合较快;冬天气温低时,聚合时间会延长。可以根据环境温度的不同调节APS的加入量。


二、电泳
  • 1×TBE电泳液配制:
    取50mL 10×TBE,加蒸馏水450mL,即配成500mL 1×TBE。将凝胶板固定在电泳装置上,向内槽和外槽中加入足够1×TBE电泳液。用1mL吸头冲洗加样孔1~2次。
    注:试剂盒配套的10×TBE缓冲液仅够配制凝胶用,电泳用1×TBE电泳缓冲液请自己制备。
  • 样品处理:
    取待测样品,加入等体积2×TBE尿素上样缓冲液。如5μL样品加5μL上样缓冲液,短暂离心后70℃处理5分钟后立即冰浴,取5~10μL上样。
    TBE-Urea-PAGE中判断单链DNA大小可以选择单链DNA Ladder(20~75nt,货号:RFT202)作为分子量标准。
  • 200 V稳压电泳,等待上样缓冲液的溴酚蓝指示前沿到凝胶底部时终止电泳,取出凝胶进行后续实验。
    恒电压起始电流结束电流电泳时间
    200V15~20 mA/板胶10~15 mA/板胶60+ min

    PAGE浓度DNA有效分离范围二甲苯菁溴酚蓝二甲苯菁溴酚蓝
    %(W/V)双链(bp)单链(nt)染料迁移率相当于
    双链DNA片段粗略大小
    染料迁移率相当于
    单链DNA片段粗略大小
    3.51000~2000750~200046010015045
    5.080~500200~10002606513035
    8.060~40050~400160457519
    12.040~20030~30070205515
    15.025~15010~15060155210
    20.06~1008~1204512508


三、染色
  • 漂洗:拆下凝胶后,适量蒸馏水漂洗3~5分钟。
  • 单链DNA可以用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RFT204),核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RFT205)或核酸快速银染试剂盒(货号:RFT206)进行染色,也可以选择使用核酸染料进行染色。
  • 使用核酸染料染色方法:
    TBE-Urea-PAGE胶推荐使用RealGood类染料后染染色,以下程序用RealGood红色核酸染料(货号:RFT232)进行染色。
    • 即用型染色液配制(配制量:100mL)
      即用型RealGood Red核酸染色液
      1×TBE100mL
      RealGood Red核酸染料20μL
    • 染色:凝胶浸泡于即用型染色液中,常温避光摇床40~60rpm震荡染色30分钟。
    • 观察:紫外灯或蓝光仪上观察条带。



  • 使用单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(货号:RFT204)染色:
    DNA尿素PAGE电泳试剂盒
    15% Urea-PAGE 1×TBE 200V 55min
    Lane 1-7为20,25,30,35,40,50,75nt ssDNA上样量为1μg;
    Lane 8,9,10 ssDNA Marker(20~75nt)上样量为5μL。
  • 使用核酸PAGE电泳染色试剂盒(货号:RFT205)染色:
    DNA尿素PAGE电泳试剂盒
    15%尿素变性胶分离单链DNA
    Lane 1-7为20,25,30,35,40,50,75nt ssDNA上样量为1μg;
    Lane 8 ssDNA Marker(20~75nt)上样量为5μL。

相关搜索:DNA尿素PAGE电泳试剂盒TBE-Urea-PAGEPAGE电泳DNA Urea PAGE Electrophoresis Kit
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