产品目录

热启动Bst5.0 DNA聚合酶是新一代的以DNA/RNA为模板的LAMP扩增反应聚合酶，该酶融合了Bst2.0的dUTP渗入能力、Bst3.0的快速扩增及抗杂
质特性、Bst4.3的70℃高温反应优势于一身，该酶还可完全使用dUTP(100%)来代替反应体系中的dTTP。100% dUTP的使用能力，对于LAMP的防污染至关重要。

• Bst5.0包含热启动Aptamer，其确保在<30℃时，酶活封闭效率>90%，在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系，并大幅降低了低温条件下的非特异扩增；
  
• 在65～70℃条件下，均可有效进行LAMP扩增；
  
• 相比于Bst2.0使用dUTP的使用比例仅50%（这无法满足LAMP的防污染要求），Bst5.0无需使用dTTP，可完全替换成dUTP，速度几乎无下降。在配合热敏UDG的条件下，可有效的防止气溶胶引起的污染。

• 热启动Bst5.0 DNA聚合酶与IsoBuffer均不含甘油，可用于冻干体系。
  
• Mg²⁺的使用浓度为4～10mM浓度，IsoBuffer中没有Mg²⁺，通常情况下，在6～8mM Mg²⁺条件下可获得较好的LAMP结果。
  
• Bst5.0可以使用dNTP或dU/VTP，推荐的使用浓度为1mM each，必要条件下可在0.5～1.25mM间调整。
  
• 未知的原因，在反应体系中加入30～50mM GuHCl，对多数引物来讲，可加速LAMP扩增3～5min，并提高LAMP检测灵敏度。但这不是绝对的，有些引物组具有相反的效应。
  
• 在防污染的实验中，建议的热敏UDG的使用浓度1×下为2~4 mU/μL。体系配制完毕后，室温放置2～5min消化dU污染物，再上机检测。由于UDG在65～70℃条件下需要2～3min失活，因此加入UDG后，通常反应时间会推迟2～3min。对于产物中AT含量较高的实验，通常可有效消除100cps/μl的污染物，而GC含量较高时消除能力可能会下降到10cps/μL。由于Oligo区均为dNTP合成产物，所以该区域的污染或Dimer产物均不能消除。无论如何，存在污染物的情况下，加入UDG后通常可延缓污染反应8～12min，这已经满足终点参数的判读设置。

• 配制10×LAMP Primer Mix：
  

  成分	10×Primer Mix	1×浓度
  FIP/BIP	10～16μM each	1～1.6μM each
  LF/LB	4～8μM each	0.4～0.8μM each
  F3/B3	2μM each	0.2μM each

• 配制LAMP反应体系：
  

  成分	用量	终浓度
  热启动Bst5.0 DNA聚合酶(16U/μL)	0.5μL	0.32U/μL
  10×IsoBuffer(Mg2+-free)	2.5μL	1×
  dU/VTP混合液(25mM each)	1μL	1mM
  100mM Mg2+	1.5μL	6mM
  10×Primers	2.5μL	1×
  模板DNA/RNA	10ng	-
  ddH2O	至25μL	-

  • 对于绝大多数的LAMP扩增来讲，0.16～0.32U/μl的Bst5.0终浓度，均可获得理想的扩增结果，必要条件下进行其它调整。
• 扩增反应：置于65～70℃反应20～40min。