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本制品是专门用于RNA非变性PAGE电泳的试剂盒，PAGE电泳后可直接用于银染等后续试验。

• 一站式，用户只需要准备去离子水和样品，不需要单独优化各种条件，十分方便。
  
• 安全，免去了实验人员接触粉末状的有毒物品丙烯酰胺。
  
• 本制品足够30次mini PAGE凝胶电泳。

• 准备工作1：用固相RNase清除剂清洁工作平台。直接将固相RNase清除剂原液或10倍的新鲜稀释液喷于台面，5分钟后用普通吸水纸擦净，最后用沾有固相RNase清除剂1000倍新鲜稀释液的吸水纸擦净，晾干。
  
• 准备工作2：用固相RNase清除剂清洁玻璃和塑料器皿将器皿浸泡在固相RNase清除剂的10或100倍的新鲜稀释液中，静置处理5分钟后取出，再用固相RNase清除剂1000倍或10000倍新鲜稀释液浸泡二次以上，倒立晾干后备用。
  
• 配制1×TBE电泳液：将适量的10×TEB电泳液用RNase-free水稀释10倍，得到1×TBE电泳液待用。此溶液需要现用现配，否则易长菌。
  
• 配制10%过硫酸铵溶液：精确称取约100mg过硫酸铵到一干净的1.5mL离心管中，按每1mg过硫酸铵加10μL RNase-free水的比例加入RNase-free水，摇晃溶解待用。配制好的10%过硫酸铵溶液可以在4℃存放一周，超过一周不能再用。
  
• 估计所需要的凝胶溶液的体积：一般配制一块13cm×15cm×0.8mm的胶需要15mL凝胶溶液，配制一块36cm×45cm×0.8mm的胶需要120mL凝胶溶液。
  
• 配制30%的丙烯酰胺-甲叉双丙烯酰胺溶液（29∶1）：将2g甲叉双丙烯酰胺全部倒入装有60g丙烯酰胺干粉的瓶中，加入146mL自备的RNase-free水，充分摇晃混匀即得30%的AB溶液。
  
• PAGE胶配制：
  

  PAGE胶浓度	各成分用量(mL)			总体积(mL)
  	去离子水	30% AB溶液	10×TBE电泳液
  5%	73.4	16.6	10.0	100
  6%	70.0	20.0
  7%	66.7	23.3
  8%	63.3	26.7
  9%	60.0	30.0
  10%	56.7	33.3
  11%	53.3	36.7
  12%	50.0	40.0

  Acrylamide/Bis的终浓度需要根据待分离RNA长度选择(见下表)。
  

  需分离的RNA长度范围	Acrylamide/Bis终浓度
  6～100nt	20%
  25～150nt	15%
  40～200nt	12%
  60～400nt	8%
  80～500nt	5%

• 搅拌摇晃均匀。
  
• 将三角瓶接上真空系统抽真空处理10～15分钟以充分去除溶液中的氧气（氧气会降低聚合反应效率）。若条件有限，此步可省略。
  
• 边摇晃溶液变加入100μL TEMED和500μL 10%过硫酸铵溶液。
  
  如果选择其他工作浓度的Acrylamide/Bis，此二成分的用量不需要随之改变。但如果配制的凝胶溶液的体积变化，此二成分的用量要按比例改变。
• 再充分摇晃约30秒后迅速灌胶，然后插入样品梳，室温放置30～60分钟等待胶凝固。
  
• 将凝胶板放置在电泳装置上后，在上下层分别加入适当量的1×电泳缓冲液。如果不马上使用，需要有湿纸将上样孔端盖住以防凝胶过度干燥。
  
• 待PAGE胶凝固后拔出梳子，用1×TEB液冲洗加样孔。
  
• 放4℃冰箱预冷30分钟～12小时。为了防止PAGE胶收缩，最好在其顶部加少量1×TBE缓冲液。
  
• 将预冷后的PAGE凝胶板固定在电泳装置上，往上槽和下槽中加入足够1×TEB电泳液
  
• 将3～5μL RNA样品与等体积2×RNA非变性PAGE上样液混合，85℃处理5分钟后冰浴，用前短暂离心后取2μL上样。上样量跟检测方法的灵敏度相关，上述上样量是针对核酸银染检测法。
  
• 打开电泳仪，25 W功率，电泳5～7小时（对3～40cm长的PAGE胶而言），到染料移动到凝胶边缘为止。
  
• 将凝胶一面的玻璃板揭开，直接用仍然附着在另一玻璃板上的凝胶进行染色观察。