产品货号:
BTN81104
中文名称:
超快核酸银染试剂盒
英文名称:
Silver Stain for Nucleic Acid PAGE
产品规格:
1000mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
核酸银染的原理是银离子(Ag+)可与核酸(DNA和RNA)形成稳定的复合物,然后用还原剂如甲醛在碱性环境下使Ag+还原成银颗粒,可把核酸电泳带染成黑褐色。本制品就是根据此原理开发。
- 既可用于聚丙烯酰胺凝胶电泳的核酸染色,也用于琼脂糖凝胶染色。
- 既可检测DNA,也可以检测RNA。既可检测单链也可以检测双链。最短可以10几个碱基。
- 其灵敏度比EB高200倍,能检测到10ng的DNA条带。
- 可用于检测SSR标记、SNP标记。
- 比常规的银染方法快捷,只有染色和显影两步,只需要20分钟。
组分 | 规格 |
溶液A成分一(干粉) | 2g |
溶液A成分二,10× | 100mL |
溶液A成分三,10× | 100mL |
溶液B成分一,10× | 100mL |
溶液B成分二 | 5mL |
保存:室温,有效期1年。
一、配制溶液A(即染色液)
溶液A需要新鲜配制,不能存放。所需溶液A(染色液)的体积跟PAGE胶的面积大小相关,一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20~30mL。下面的用量是针对配制100mL溶液A。如果配制的溶液A的体积不是100mL,则需按比例改变各成分用量。
- 在一干净烧杯中加入下列成分,充分搅拌混匀即可。
成分 用量 自备去离子水 80mL 溶液A成分一 0.2g 溶液A成分二 10mL 溶液A组分三 10mL
二、配制溶液B
需要配制的溶液B(显色液)的体积完全跟PAGE胶的大小相关,一般的10cm×10cm的mini-PAGE胶需要20~30mL溶液B。下面的用量是针对配制100mL溶液B。如果配制的溶液B的体积不是100mL,则需按比例改变各成分用量。
- 在一干净烧杯中加入下列成分搅拌混匀即可。溶液B需要新鲜配制
成分 用量 自备去离子水 89.5mL 溶液B成分一 10mL 溶液B组分二 0.5mL
三、染色
- PAGE电泳结束后,将PAGE胶转移到装有去离子水的瓷盘中,漂洗2次,每次2分钟。
- 将PAGE胶转移到适当体积的溶液A,使溶液A在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温染色时间10分钟。
- 倒掉溶液A,用去离子水快速漂洗2次,每次半分钟。
- 将PAGE胶转移到适当体积的溶液B,使溶液B在轻柔摇晃过程中能够淹没PAGE胶。室温摇晃直到颜色显现,一般需要10分钟左右。
- 将PAGE胶置于适当背景下照相。
核酸和蛋白质银染注意事项
- 银染主要出现在PAGE胶的表面,故用薄胶(0.5~0.75mm)可以提高灵敏度。
- 对于已经用考马斯亮蓝染色的SDS-PAGE胶,可用甲醇将胶漂洗后,继续进行银染。考马斯亮蓝染色中使用的乙酸会干扰银染,因此要确保将PAGE凝胶中残留的乙酸彻底洗净。
- 不同蛋白质对银染的反应是不一样的,尤其是碱性蛋白染色效果差。因此,不宜用银染测定不同蛋白的比例。
- PAGE凝胶银染后背景呈均一的黑色多是水中的杂质引起的,所以溶液的配制应使用电导率小于1μS的去离子水。
- 如果染色后有烟雾状灰色或烟雾状棕色沉淀出现在凝胶表面,可能是在漂洗不彻底,或是染色过程时温度太低。
- 较深的银染背景多是丙烯酰胺中的杂质所致。
- PAGE胶中的甘油、尿素、甘氨酸、Triton X-100和两性电解质这些物质都会干扰银染,需要增加固定步骤,固定的目的就是去除这些物质。
- 室温操作时,温度的波动往往会干扰银染的效果,恒温水浴可以解决这个问题。
- SDS-PAGE凝胶中的巯基乙醇会导致在60kDa或67kDa处出现两条带。减少巯基乙醇的用量即可避免。
- 凭借戊二醛预处理可以使各种蛋白质的染色提高40倍。
- 染色使用的玻璃器皿必须非常干净,用酸浸泡可以满足要求。
- 银染应尽快照相,随着时间延长,蛋白条带会变浅,而背景会加深。
- 银染器皿也非常重要。最好是玻璃平皿,因为其化学性质极其稳定,几乎不与银染试剂中的任何成分发生反应,且不具有吸附染料的特性。其次是医用搪瓷盘,瓷釉为无机玻璃质材料,能耐各种浓度的无机酸(包括强氧化性酸)、有机酸、弱碱和强有机溶剂,但不耐酸、碱介质交替使用,而常规银染法就是酸碱介质交替使用,因此搪瓷盘银染效果不如玻璃平皿。塑料种类较多,如果塑料是由含氨基官能团的有机物(脲、三聚氰胺或苯代三聚氰胺)与醛类(主要是甲醛)化合物经缩聚反应而得,则这种塑料会在碱性溶液中与有强还原作用的甲醛发生反应,进而使甲醛消耗,减弱银离子与蛋白的结合,降低显色敏感度和显色速度。
相关搜索:超快核酸银染试剂盒,PAGE胶核酸银染,Silver Stain for Nucleic Acid PAGE