产品货号:
YTB4065
中文名称:
全血PCR增强液
英文名称:
2×Blood PCR Enhancer
产品规格:
20μL×200T|20μL×1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品是一种使用百奥莱博的BloodTaq DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4081)或BloodTaq HF DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4082)时,克服因模板高GC含量所导致的PCR扩增障碍的PCR增强剂。高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点,本产品可用于含有肝素、柠檬酸钠以及EDTA等抗凝血的直接PCR反应,从而大大提高了高GC含量DNA模板的扩增效率及扩增的特异性。本产品也可以用于普通PCR时扩增高GC含量的目的片段。
2×Blood PCR Enhancer可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶,如百奥莱博的BloodTaq DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4081)和BloodTaq HF DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4082),NEB的Hemo KlenTaq等。
本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果参考图1。
图1.使用2×Blood PCR Enhancer扩增高GC含量目的基因的电泳效果图。图A中可见,HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%),在添加2×Blood PCR Enhancer后可以扩增出单一的非常明亮的特异性条带,但不添加时就不能扩增获得特异性的目的条带。图B中可见,扩增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)时,使用百奥莱博的本产品能扩增出单一的条带,而使用公司A和B的类似产品主带比较微弱并且杂带很多,使用常见的最终浓度为1.3M的甜菜碱(Betaine)的扩增高GC含量的该片段时效果也欠佳。
保存:-20℃
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2×Blood PCR Enhancer可以适用于商业化的常见的多种耐血DNA聚合酶,如百奥莱博的BloodTaq DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4081)和BloodTaq HF DNA Polymerase (Blood-resistant,货号:YTB4082),NEB的Hemo KlenTaq等。
本产品直接扩增EDTA抗凝血中高GC含量基因的效果参考图1。
图1.使用2×Blood PCR Enhancer扩增高GC含量目的基因的电泳效果图。图A中可见,HRES1基因488bp片段(GC含量81%)和DIP2A基因1185bp片段(GC含量71%),在添加2×Blood PCR Enhancer后可以扩增出单一的非常明亮的特异性条带,但不添加时就不能扩增获得特异性的目的条带。图B中可见,扩增HRES1基因488bp片段(GC含量81%)时,使用百奥莱博的本产品能扩增出单一的条带,而使用公司A和B的类似产品主带比较微弱并且杂带很多,使用常见的最终浓度为1.3M的甜菜碱(Betaine)的扩增高GC含量的该片段时效果也欠佳。
组分 | 20μL×200T | 20μL×1000T |
2×Blood PCR Enhancer | 2mL | 5×2mL |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-20℃
- 在使用本产品2×Blood PCR Enhancer的同时,必须同时使用和耐血DNA聚合酶配套的最终浓度为1×的PCR Buffer。
- 本产品溶解时如果有结晶状沉淀物,可以在50℃水浴温育片刻促进溶解,并确保完全溶解后使用。
- 请尽量使用新近采集的抗凝血样本进行检测;如果是冻存的样本,尽量避免反复冻融,以免在冻融过程中导致目的基因的断裂和降解。
- 设置PCR反应体系时,抗凝血的推荐用量为PCR体系总体积的5~10%左右,可以直接添加到PCR体系中,无需进行任何额外处理。
- PCR反应结束之后,建议3000~5000g离心3~5min以沉淀血细胞碎片,便于吸取上清用于电泳分析等。
注意:由于抗凝血本身的原因,PCR结束后在PCR管底部会出现透明凝胶状物质,此为正常现象。 - 由于PCR反应非常灵敏,可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
- PCR反应参数的设置请参照特定的耐血DNA聚合酶的说明书进行。通常对于扩增高GC含量的DNA模板,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
- PCR反应体系的设置可以参考特定的耐血DNA聚合酶进行,仅仅添加反应总体积一半的本试剂盒所提供的2×Blood PCR Enhancer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:
- 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将BloodTaq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
- 参考下表在冰浴上设置PCR反应体系(如果有多个类似的PCR反应,可以先配制大体积的包含水、buffer、dNTP和BloodTaq酶的混合物,然后分装到各PCR反应管内。根据情况,有时混合物中也可以包括引物):
试剂 20μL体系 50μL体系 终浓度 Nuclease-Free Water (4-x)μL (10-y)μL - 10X BloodTaq PCR Buffer 2μL 5μL 1X 2×Blood PCR Enhancer 10μL 25μL 1X dNTP (2.5mM each) 2μL 5μL 0.25mM each 引物混合物(10μM each) 1μL 2.5μL 0.5μM each BloodTaq DNA Polymerase 1μL 2.5μL - 抗凝全血 xμL yμL - 总体积 20μL 50μL
注意:
① 模板使用量:
作为PCR模板的抗凝血用量一般为PCR反应体系总体积的1~20%,建议起始使用量为5%。如果PCR反应用于检测基因组的DNA片段,可以适当减少抗凝血用量;如果用于检测血液样品中某种病毒或细菌等微生物的目的DNA片段,建议使用50μL的PCR体系,并使用较大的模板血量。对于高GC含量的PCR扩增,可以使用扩增高GC含量DNA片段的2×Blood PCR Enhancer,或者尝试向PCR体系中加入终浓度1~10% (体积百分比)的DMSO。
② 引物浓度:
通常引物的终浓度为0.5μM时可获得良好的检测效果,也可以根据情况在0.1~1.0μM范围内调整引物的终浓度。扩增效率不高的情况下,可提高引物的浓度;发生非特异性反应时,可降低引物浓度。 - 用移液器轻轻吹打混匀或轻微Vortex混匀,室温离心数秒,使液体积聚于管底。
- 如果所使用的PCR仪有热盖则省略本步骤。如果PCR仪没有热盖,则在管内滴入一滴矿物油(货号:YT399)。
- 把设置好的PCR反应体系置于PCR仪上,开始PCR反应。PCR反应参数的设置可以参考该耐血DNA聚合酶的常规参数,同时可以考虑适当延长延伸时间。
- 融解并混匀PCR反应所需的各种溶液。将BloodTaq DNA Polymerase置于冰浴上或冰盒内。
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