产品货号：
YT398
中文名称：
cDNA第二链合成试剂盒
英文名称：
Second Strand cDNA Synthesis Kit
产品规格：
10次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本产品是一种在合成了cDNA第一链的基础上去除RNA-DNA杂合链中的RNA链并合成cDNA第二链，最终形成双链cDNA的试剂盒。本试剂盒包含了进行cDNA第二链合成所需的各种试剂。
本试剂盒采用RNase H使RNA-DNA杂合链中的RNA产生切口，此时DNA Polymerase I可以通过切口平移反应催化形成cDNA第二链。使用本试剂盒合成的双链cDNA，可以直接用于后续的常规PCR、real-time PCR、cDNA文库的构建等。
| 组分 | 规格 |
| RNase H(1U/μL) | 10μL |
| DNA Polymerase I(10U/μL) | 30μL |
| 10×Reaction Buffer | 100μL |
保存：-20℃
- 进行第二链合成时，dNTP比较适当的最终浓度约为0.2mM。如果最终浓度过低，在反应体系中需要适当补充dNTP。
- 如果希望获得平末端的双链cDNA，可以用T4 DNA Polymerase(YT403)或DNA末端平滑试剂盒(YT404)处理。
- 酶使用时宜存放在冰盒内或冰浴上，使用完毕后宜立即放置于-20℃保存。
- 本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 用反转录酶，例如BalbRT II M-MLV反转录酶(YT394)或BalbRT II cDNA第一链合成试剂盒(YT397)合成cDNA第一条链，70℃孵育10分钟终止反应。
- 在冰浴上向已经合成第一条链的20μL反应体系中依次加入如下试剂：
成分 用量 10×Reaction Buffer 8μL 无核酸酶去离子水 68μL RNase H (1U/μL) 1μL DNA Polymerase I (10U/μL) 3μL - 按上述体系配好之后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
- 15℃孵育2小时。
注意：反应温度不能超过15℃ - 加入5μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
- 后续可以使用酚氯仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化合成的双链cDNA，也可以使用适当的DNA纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒(YT009)可以向百奥莱博订购。
相关搜索：cDNA第二链合成试剂盒，第二链cDNA合成试剂盒，Second Strand cDNA Synthesis Kit