产品货号:
YT377
中文名称:
富GC含量DNA模板PCR反应缓冲液
英文名称:
GC-rich PCR Buffer
产品规格:
2ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
本制品提供了4种不同的GC-rich PCR Buffer,为扩增高GC含量的DNA片段提供了多种不同的选择,大大提高了高GC含量DNA片段的扩增成功率。可以适用于各种常见的耐热DNA聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNA polymerase等。
各种GC-rich PCR Buffer可以单独使用,也可以组合使用。这样可以在更多条件下优化PCR条件。提供了推荐的几种经过优化的GC-rich PCR Buffer的组合方式,便于用户直接选用。
根据相关文献报道,单一的GC-rich PCR Buffer对于某一个高GC含量的DNA片段的扩增效果很好,但对于另外一个高GC含量的DNA片段则很可能会扩增效果不太理想。正因为很难采用一种通用的GC-rich PCR Buffer完成对于不同的高GC含量DNA片段的扩增,因此对于高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点。针对这一实际情况,百奥莱博推出了可以给予用户多种条件进行优化组合的4管套装GC-rich PCR Buffer。
组分 | 规格 |
5×GC-rich PCR Buffer A | 0.5mL |
5×GC-rich PCR Buffer B | 0.5mL |
5×GC-rich PCR Buffer C | 0.5mL |
5×GC-rich PCR Buffer D | 0.5mL |
保存:-20℃
- 在使用本试剂盒提供的GC-rich PCR Buffer的同时,必须同时使用和DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的含镁离子PCR Buffer。
- 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
- PCR反应参数的设置也可以参考特定的耐热DNA聚合酶的说明进行。通常对于扩增高GC含量DNA片段的情况,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
- PCR反应体系的设置可以参考特定的耐热DNA聚合酶进行,仅仅添加适量本试剂盒所提供的GC-rich PCR buffer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:
成分 终浓度 50μL体系 20μL体系 双蒸水或Milli-Q水 - (26.75-x)μL (10.7-y)μL 10×PCR Buffer (with Mg2+) 1× 5μL 2μL 5×GC-rich Buffer 1X 10μL 4μL dNTP (2.5mM each) 0.2mM each 4μL 1.6μL 模板DNA 10pg~1μg* x μL y μL 引物混合物(10μM each) 0.8μM 4μL 1.6μL Taq DNA Polymerase (5U/μl) 1.25U/50μL 0.25μL 0.1μL 总体积 - 50μL 20μL - 也可以尝试采用0.5×GC-rich Buffer:
成分 终浓度 50μL体系 20μL体系 双蒸水或Milli-Q水 - (31.75-x)μL (12.7-y)μL 10×PCR Buffer (with Mg2+) 1× 5μL 2μL 5×GC-rich Buffer 0.5× 5μL 2μL dNTP (2.5mM each) 0.2mM each 4μL 1.6μL 模板DNA 10pg~1μg* x μL y μL 引物混合物(10μM each) 0.8μM 4μL 1.6μL Taq DNA Polymerase (5U/μl) 1.25U/50μL 0.25μL 0.1μL 总体积 - 50μL 20μL - 还可以尝试在PCR反应体系中同时含有2~4种不同的1×GC-rich Buffer或0.5×GC-rich Buffer。以形成不同的组合用于优化PCR反应条件。优先推荐的GC-rich Buffer及其组合(最终浓度)包括:
- 1×GC-rich Buffer A
- 1×GC-rich Buffer B
- 0.5×GC-rich Buffer B
- 1×GC-rich Buffer C
- 2×GC-rich Buffer C
- 1×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
- 2×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
- 1×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
- 2×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
- 1×GC-rich Buffer A
- 可以根据初步的PCR扩增效果,再对效果较好的GC-rich Buffer再进行优化组合,进一步优化GC-rich Buffer的组合。最后根据PCR反应的扩增效果,选择最佳的GC-rich PCR buffer或其组合。
相关搜索:富GC含量DNA模板PCR反应缓冲液,高GC含量PCR Buffer,高GC含量PCR优化套装,富含GC PCR缓冲液,GC PCR优化试剂盒,GC-rich PCR Buffer