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富GC含量DNA模板PCR反应缓冲液图片
产品货号:
YT377
中文名称:
富GC含量DNA模板PCR反应缓冲液
英文名称:
GC-rich PCR Buffer
产品规格:
2ml
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品提供了4种不同的GC-rich PCR Buffer,为扩增高GC含量的DNA片段提供了多种不同的选择,大大提高了高GC含量DNA片段的扩增成功率。可以适用于各种常见的耐热DNA聚合酶例如Taq DNA polymerase、Pfu DNA polymerase等。


各种GC-rich PCR Buffer可以单独使用,也可以组合使用。这样可以在更多条件下优化PCR条件。提供了推荐的几种经过优化的GC-rich PCR Buffer的组合方式,便于用户直接选用。


根据相关文献报道,单一的GC-rich PCR Buffer对于某一个高GC含量的DNA片段的扩增效果很好,但对于另外一个高GC含量的DNA片段则很可能会扩增效果不太理想。正因为很难采用一种通用的GC-rich PCR Buffer完成对于不同的高GC含量DNA片段的扩增,因此对于高GC含量DNA片段的扩增一直是分子生物学操作过程中的一个难点。针对这一实际情况,百奥莱博推出了可以给予用户多种条件进行优化组合的4管套装GC-rich PCR Buffer。




组分规格
5×GC-rich PCR Buffer A0.5mL
5×GC-rich PCR Buffer B0.5mL
5×GC-rich PCR Buffer C0.5mL
5×GC-rich PCR Buffer D0.5mL

保存:-20℃


  • 在使用本试剂盒提供的GC-rich PCR Buffer的同时,必须同时使用和DNA聚合酶配套的最终浓度为1X的含镁离子PCR Buffer。
  • 由于PCR反应非常灵敏可以扩增目的基因序列超过1000万倍,在操作时请注意避免微量待扩增DNA的污染,并尽量考虑设置不加模板的空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。



  • PCR反应参数的设置也可以参考特定的耐热DNA聚合酶的说明进行。通常对于扩增高GC含量DNA片段的情况,延伸时间可以比常规的延伸时间适当延长一些。
  • PCR反应体系的设置可以参考特定的耐热DNA聚合酶进行,仅仅添加适量本试剂盒所提供的GC-rich PCR buffer即可。可以参考如下反应体系设置PCR反应:
    成分终浓度50μL体系20μL体系
    双蒸水或Milli-Q水-(26.75-x)μL(10.7-y)μL
    10×PCR Buffer (with Mg2+)5μL2μL
    5×GC-rich Buffer1X10μL4μL
    dNTP (2.5mM each)0.2mM each4μL1.6μL
    模板DNA10pg~1μg*x μLy μL
    引物混合物(10μM each)0.8μM4μL1.6μL
    Taq DNA Polymerase (5U/μl)1.25U/50μL0.25μL0.1μL
    总体积-50μL20μL

  • 也可以尝试采用0.5×GC-rich Buffer:
    成分终浓度50μL体系20μL体系
    双蒸水或Milli-Q水-(31.75-x)μL(12.7-y)μL
    10×PCR Buffer (with Mg2+)5μL2μL
    5×GC-rich Buffer0.5×5μL2μL
    dNTP (2.5mM each)0.2mM each4μL1.6μL
    模板DNA10pg~1μg*x μLy μL
    引物混合物(10μM each)0.8μM4μL1.6μL
    Taq DNA Polymerase (5U/μl)1.25U/50μL0.25μL0.1μL
    总体积-50μL20μL

  • 还可以尝试在PCR反应体系中同时含有2~4种不同的1×GC-rich Buffer或0.5×GC-rich Buffer。以形成不同的组合用于优化PCR反应条件。优先推荐的GC-rich Buffer及其组合(最终浓度)包括:
    • 1×GC-rich Buffer A
    • 1×GC-rich Buffer B
    • 0.5×GC-rich Buffer B
    • 1×GC-rich Buffer C
    • 2×GC-rich Buffer C
    • 1×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
    • 2×GC-rich Buffer C + 1×GC-rich Buffer D
    • 1×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
    • 2×GC-rich Buffer C + 0.2×GC-rich Buffer B
  • 可以根据初步的PCR扩增效果,再对效果较好的GC-rich Buffer再进行优化组合,进一步优化GC-rich Buffer的组合。最后根据PCR反应的扩增效果,选择最佳的GC-rich PCR buffer或其组合。

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