产品货号：
WH0068
中文名称：
Pfu DNA聚合酶
英文名称：
Pfu DNA Polymerase
产品规格：
250U|500U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是从克隆有Pyrococcus furiosis DNA Polymerase基因的大肠杆菌中分离纯化的，Pfu DNA Polymeras具有5′-3′ DNA聚合酶活性和3′-5′的外切酶活性，能纠正DNA扩增过程中产生的碱基错配。Pfu酶是目前已发现的所有耐高温DNA Polymerase中出错率最低的。其PCR产物为平端，可加A处理再与T载体连接或使用平末端克隆载体。本制品可用于DNA的高保真扩增，如基因表达克隆、基因定点突变、细胞内基因点突变的分析（SNP）和末端补平等。
保存：-20℃
10×Pfu Buffer：
200mM Tris-HCl(pH8.8);100mM KCl;100mM (NH4)2SO4;20mM MgSO4;其它成分。
10×Pfu Buffer分为含Mg2+和不含Mg2+两种，可自选。不含Mg2+的Buffer另外配有25mM Mg2+。如果没有特别指定，通常提供的为含有Mg2+的Buffer
1单位（U）Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。以人基因组DNA为模板，扩增1kb的片段。
相关搜索：Pfu DNA聚合酶，Pfu酶，Pfu DNA Polymerase
| 组分 | WH0068-1 | WH0068-2 |
| Pfu DNA Polymerase | 250U | 500U |
| 10×Pfu Buffer | 1.8mL | 1.8mL |
保存：-20℃
10×Pfu Buffer：
200mM Tris-HCl(pH8.8);100mM KCl;100mM (NH4)2SO4;20mM MgSO4;其它成分。
10×Pfu Buffer分为含Mg2+和不含Mg2+两种，可自选。不含Mg2+的Buffer另外配有25mM Mg2+。如果没有特别指定，通常提供的为含有Mg2+的Buffer
1单位（U）Pfu DNA Polymerase活力定义为在74℃、30min内，以活性化的大马哈鱼精子DNA作为模板/引物，将10nmol脱氧核苷酸掺入到酸不溶物质所需的酶量。
SDS-PAGE检测纯度大于99%；经检测无外源核酸酶活性；PCR方法检测无宿主残余DNA；能有效地扩增人基因组中的单拷贝基因；室温存放一周，无明显活性改变。
- Pfu酶具有3'-5'的外切酶活性，所以Pfu酶扩增时延伸速度远比Taq酶低，应根据扩增产物的长度设置相应的延伸时间，一般情况下Pfu酶的延伸速度为每分钟0.5～1 Kb；同时Pfu酶的3'-5'的外切酶活性可能降解引物，所以应先加dNTPs后，再加Pfu酶到反应体系中，并立即进行PCR反应。
- 用Pfu酶扩增时，引物的纯度要求较高，引物长度大于18个碱基，Tm在55～80℃之间，引物浓度在0.1～0.5μM之间，比Taq酶略高。
- Pfu酶的热稳定性比Taq酶好，对于GC含量很高的模板，变性温度可以提高到98℃，对Pfu酶的活性无影响。
注意：以下举例为常规PCR反应系统，仅供参考。实际反应条件因模板、引物等的结构不同而各异，需根据模板、目的片段的大小、碱基序列和引物长短等具体情况，设定最佳反应条件。以人基因组DNA为模板，扩增1kb的片段。
- PCR反应体系的建立，50μL体系如下（可根据比例放大或缩小体系)：
成份 用量 Template ＜1μg Primer 1（10μM） 1μL Primer 2（10μM） 1μL 10×Pfu Buffer 5μL dNTP Mixture（2.5mM) 4μL Pfu （2.5U/μl) 0.5～1μL ddH2O 补至50μL - PCR反应循环的设置：
- 结果检测：反应结束后取5μL反应产物，琼脂糖凝胶电泳检测。
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