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2×Multiplex PCR MasterMix(UNG)是由BaldStar Taq DNA Polymerase、Mg²⁺、dNTPs(含dUTP)、UNG酶以及PCR稳定剂等组成的PCR预混体系。使用本制品无需进行繁杂的PCR反应条件的优化过程，只需进行简单的条件摸索即可轻松进行多重PCR反应。

本制品所含的BaldStar Taq DNA Polymerase是经化学修饰的热启动酶，可以有效减少PCR反应初期因引物错配而产生的非特异扩增。独特的缓冲体系，使多重PCR反应所有的引物都能有效延伸，无需额外优化。此MasterMix中还包含GC Enhancer，有助于实现“困难”模板（比如，高GC含量的模板）的高效扩增。本制品运用dUTP-UNG防污染系统，可有效去除了PCR产物的残留污染，大大降低了由于扩增产物污染而导致的假阳性。UNG酶在PCR循环中的预变性步骤即可被灭活，因此不会影响新的含dU碱基PCR产物的形成。

Multiplex PCR MasterMix(UNG)可有效防止PCR产物的残留污染，适用于防污染多重PCR反应，比如微卫星分析、基因分型和SNP检测等。

• 经检验无外源核酸酶活性；
  
• PCR方法检测无宿主残余DNA；
  
• 2～8℃存放3天，扩增性能无明显改变。

• 配制PCR反应体系：
  

  成分	用量	终浓度
  2×Multiplex PCR MasterMix(UNG)	25μL	1×
  Primer Mix，10μM each	1μL	0.2μM
  Template DNA	适量
  ddH2O	至50μL

  注意：引物设计时，尽量减小各引物的Tm间的差值，差值尽量控制在5℃以内。各引物浓度请以终浓度0.05～0.2μM作为设定范围的参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性扩增时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
  
• 设置PCR反应程序：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  UNG酶消化	50℃	2～10min	1
  预变性	95℃	10min	1
  变性	95℃	30s	30～40
  退火	55～65℃	30s
  延伸	72℃	60s/kb
  终延伸	72℃	5min	1

  注意：
  
  • 一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
    
  • 延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本制品中所包含的BaldStar Taq DNA Polymerase的扩增效率为1kb/min。
    
  • 可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
• 结果检测：
  本制品不含染料，反应结束后，取5μL反应产物加入适量上样缓冲液后进行电泳检测结果。