产品货号：
WE0110
中文名称：
2×Babuddy MasterMix(含染料)
英文名称：
2×Babuddy MasterMix(With Dye)
产品规格：
1ml|5ml
发货周期：
已停产
产品价格：
已停产
本品是由Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase、PCRBuffer、Mg2+、dNTPs以及PCR稳定剂和增强剂组成的预混体系，浓度为2×。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase是一种快速、高扩增效率的高保真DNA聚合酶，具有5'-3'DNA聚合酶活性和3'-5'外切核酸酶活性。经过改造的聚合酶其活性区域融合有一段聚合增强结构域，独特的结构极大提升了保真性和延伸速度。Babuddy Super Fidelity DNA Polymerase的保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，是普通Pfu的6倍。其延伸速率为15-30s/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷，大大缩短了反应时间。
本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。
使用本产品扩增得到的PCR产物的3'端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。
产品特点：
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。
产品组成：
注意：2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
a．模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b．引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：
a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
相关搜索：2×Babuddy MasterMix(含染料)，2×Babuddy MasterMix(With Dye)
本品特别适合于在基因克隆实验中扩增长片段DNA，尤其在扩增>10 kb的DNA片段时，优势更加明显，所扩增的片段最长可达20 kb。预配好的PCR混合液使操作更加简单快捷，可最大限度地减少人为误差和污染。
使用本产品扩增得到的PCR产物的3'端不带有“A”碱基，可直接克隆于平末端载体中。如需进行T/A克隆，需在PCR产物末端添加“A”后进行克隆。本产品具有延伸速度快、扩增效率高、保真性强的特点。适用于基因克隆、基因定点突变、SNP等实验。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测，无需再使用上样缓冲液。
产品特点：
1、高保真性：保真性是普通Taq DNA Polymerase的50倍，普通Pfu的6倍。
2、扩增速度快：其延伸速率为15-30sec/kb，成功克服了普通Pfu酶扩增效率低、扩增速度慢的缺陷。
3、特别适合于扩增长片段：扩增的片段长度可长达20kb。
产品组成：
| 组份 | 1ml | 5ml |
| 2×Babuddy MasterMix(With Dye) | 1ml | 5×1ml |
| ddH2O | 1ml | 5×1ml |
注意：2×Babuddy MasterMix含有Babuddy DNA Polymerase,2×PCR Buffer, 3 mM MgCl2和400μM dNTP mix。
使用方法：
以下举例为常规PCR反应体系和反应条件，实际操作中应根据模板、引物结构和目的片段大小不同进行相应的改进和优化。
1、PCR反应体系
| 试剂 | 20μl反应体系 | 50μl反应体系 | 终浓度 |
| 2×Babuddy MasterMix | 10μl | 25μl | 1× |
| Forward Primer，10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
| Reverse Primer，10μM | 1μl | 2.5μl | 0.5μM |
| Template DNA | 适量 | 适量 | <250ng |
| ddH2O | up to 20μl | up to 50μl |
a．模板：在50μl PCR反应体系中，DNA模板的建议用量为低复杂度模板(如质粒DNA，λDNA等)1 pg- 10ng，高复杂模板(如基因组DNA)50-250ng。
b．引物：引物浓度请以终浓度0.2-1.0μM作为设定范围的参考，推荐终浓度为0.5μM。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2、PCR反应条件
常规三步法PCR反应：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
| 变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
| 退火 | 45-72℃ | 10-30 s | |
| 延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5-10 min |
a．变性：简单模板的预变性温度为98℃，预变性时间为30 s。对于比较复杂的模板，预变性时间可延长至3分钟。
b．退火：使用本产品时，退火温度设定的基本原则是，当引物长度小于或等于20 nt时，退火温度为引物最低的Tm；当引物长度大于20 nt时，退火温度应在最低Tm的基础上以Tm+3℃退火10-30 s。当无法得到理想的扩增效率时，应以最低的Tm值逐步提升至模板延伸温度。对于Tm高的引物可以使用两步法PCR。
c．延伸：本产品中所包含的Babuddy DNA Polymerase的扩增效率为2-4 kb/min，复杂性低的模板可用4 kb/min，复杂性高的基因组DNA模板，延伸时间则应为2 kb/min，对于一些cDNA模板，延伸时间可增加到1.5 kb/min。
d．循环次数：可根据扩增产物的下游应用设定循环数。如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以，在保证产物得率的前提下，应尽量减少循环次数。
当引物的退火温度较高时，建议使用两步法进行PCR扩增：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 98℃ | 30 s-3 min | |
| 变性 | 98℃ | 5-10 s | 25-35 个循环 |
| 延伸 | 72℃ | 2-4 kb/min | |
| 终延伸 | 72℃ | 5-10 min |
储存条件：-20℃，避免反复冻融。
相关搜索：2×Babuddy MasterMix(含染料)，2×Babuddy MasterMix(With Dye)