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本制品是一款基于SYBR Green I染料进行荧光定量的试剂盒。使用基因特异性引物，反转录和qPCR反应在一管内完成，无需反复的开盖和移液操作，大大提高了检测效率，并降低了污染的风险。对于RNA样本，试剂盒采用耐热Histan V反转录酶高效合成cDNA，同时采用Spec HotStart Taq DNA Polymerase进行定量扩增。在优化的缓冲体系下，该试剂盒的检测灵敏度针对高表达的靶标，可以检至0.1pg，中等表达的靶标，可以检至1pg。该试剂盒同时也适用于DNA样本的扩增定量。该试剂盒可实现不同动植物样本、细胞、微生物核酸的高灵敏检测和定量。

• 加样和配液步骤尽量都在冰上操作。
  
• 每个组分在使用前都应震荡混匀，低速离心。

• 推荐RT-qPCR反应体系：
  

  成分	25μL反应体系	50μL反应体系	终浓度
  2×Histan Advanced SG Buffer	12.5μL	25μL	1×
  Histan Advanced UH Enzyme Mix	1μL	2μL	－
  正向引物(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  反向引物(10μM)	0.5μL	1μL	0.2μM
  模板RNA	x	y	－
  RNase-Free Water	至25μL	至50μL	－

  • 通常引物的终浓度为0.2μM，也可根据情况再0.1～1μM之间进行调整。
    
  • 本试剂盒灵敏度极高，模板总RNA再1pg～1μg，人源样本测试显示最佳投入量为1pg～100ng，控制Ct值整体再15～30之间为宜。
    
  • 推荐使用20或50μL反应体系，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
    
  • 请于超净工作台内配制，并使用无核酸酶污染的枪头、反应管；推荐使用带滤芯的枪头，避免交叉污染和气溶胶污染。
• RT-qPCR反应程序：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  反转录	50℃	6min	1
  预变性	95℃	5min	1
  扩增反应	95℃	15sec	40
  	60℃	30sec
  熔解曲线	仪器默认设置		1

  • 反转录温度可根据实验需求在50～55℃之间进行选择。对于DNA样本，反转录过程可省去。
    
  • 特殊情况下退火/延伸温度可根据引物Tm值进行调整，建议使用60℃。