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本制品是2×实时定量PCR扩增的预混合溶液。Mix中含有热启动Hiper DNA Polymerase、SYBR Green I、dNTPs、Mg²⁺。使用时，仅需在扩增体系中加入模板和引物即可进行实时荧光定量PCR，大大简化操作过程，降低污染几率。本制品采用的DNA聚合酶配体可以随温度变化实时调节DNA聚合酶活性。配方添加了有效抑制非特异性PCR扩增的因子和提升PCR反应扩增效率的因子，使定量PCR可以在宽广的定量区域内获得良好的线性关系。

• 推荐使用我公司的第一链cDNA合成预混液(去除gDNA)，以有效去除RNA样品中残留的基因组。
  
• 解冻后2×Mix可能出现絮状物质，4℃放置并上下颠倒混匀至溶液澄清，不影响试剂性能。

• 配制SYBR qPCR反应体系：
  

  成分	20μL反应体系	50μL反应体系	终浓度
  2×Hiper SYBR qPCR Mix	10μL	25μL	1×
  Forward Primer(10μM)	0.4μL	1μL	0.2μM
  Reverse Primer(10μM)	0.4μL	1μL	0.2μM
  模板DNA	x	y	－
  RNase-Free Water	至20μL	至50μL	－

  
  
  • 使用前务必充分混匀，避免剧烈震荡产生过多气泡。
    
  • 通常引物终浓度为0.2μM，也可以根据情况在0.1～1.0μM之间进行调整。
    
  • 如模板类型为未稀释的cDNA原液，使用体积不应超过qPCR反应总体积的1/10。cDNA原液建议5～10倍稀释，最佳模板加入量以扩增得到的ct值在20～30个循环为好。
    
  • 推荐使用20μL或50μL总体积，以保证目的基因扩增的有效性和重复性。
• qPCR扩增程序：
  

  ➤两步法：	➤三步法：
  步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 5min 1 变性 95℃ 10sec 40 退火/延伸 60℃ 30sec	步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 5min 1 变性 95℃ 10sec 40 退火 55～60℃ 20sec 延伸 72℃ 20sec

  • 高特异性可选择两步法，高效率扩增可选择三步法。
    
  • 预变性时间可根据不同模板和引物的具体情况适当缩短至2min。
    
  • 退火温度和时间请根据引物和目的基因的长度进行调整。
    
  • 荧光信号采集请按照仪器使用说明书要求进行实验程序设置。
    
  • 熔解曲线通常情况下可以使用仪器默认程序。