产品货号:
SY1306
中文名称:
长片段PCR预混液(含染料)
英文名称:
2×Hiper Ultra-Long PCR Master Mix(With Dye)
产品规格:
1mL|5mL|50mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品含有经过配体修饰的热稳定Taq DNA Polymerase,融合3’-5’校正活性因子以及优化的缓冲体系,能够扩增长达25kb的基因组片段、14kb的cDNA基因序列以及40kb的λDNA片段。Mix中已包含扩增所需的dNTP、Mg2+,使用时只需加入引物和模板即可进行PCR反应,避免了加样过程产生的各种损耗,同时Mix还包含了染料部分,大大减少了后续电泳的繁琐步骤。此外,体系中加入的保护剂使得本制品经过反复冻融后仍可保持稳定的活性。PCR产物的3’端带A,可直接连接至T载体。

| 组分 | 1mL | 5mL | 50mL |
| 2×Hiper Ultra-Long PCR Master Mix(With Dye) | 1mL | 5×1mL | 50×1mL |
| 25mM MgSO4 | 500μL | 1mL | 5×1mL |
| 10mM dNTPs | 100μL | 500μL | 5×1mL |
保存:-20℃,有效期1年。

- 配制PCR反应体系:
成分 用量 ddH2O 至50μL 2×Hiper Ultra-Long PCR Master Mix(With Dye) 25μL 模板DNA 适量 正向引物(10μM) 2μL 反向引物(10μM) 2μL - 反应缓冲液:缓冲液中含有2.5mM Mg2+和优化的dNTPs成分。同时试剂盒配套提供额外的MgSO4及dNTPs,对于20kb以上较难扩增的片段,可尝试添加0.5~2mM的Mg2+和200~500μM的dNTPs。
- 不同模板的推荐使用量:
模板种类 片段使用量范围(50μL反应体系) 基因组DNA或大肠杆菌菌液 10~1000ng 质粒或病毒DNA 0.5~50ng cDNA 1~5μL (不超过PCR反应总体积的1/10)
- 反应缓冲液:缓冲液中含有2.5mM Mg2+和优化的dNTPs成分。同时试剂盒配套提供额外的MgSO4及dNTPs,对于20kb以上较难扩增的片段,可尝试添加0.5~2mM的Mg2+和200~500μM的dNTPs。
- 设置PCR反应程序:
步骤 温度 时间 循环数 预变性 95℃ 3min 1 变性 98℃ 10sec 35 退火/延伸 68℃ 30sec/kb 终延伸 72℃ 10min 1 - 退火/延伸:扩增长片段建议使用两步法进行。退火/延伸时间设置30sec/kb可扩增绝大部分片段,对于20kb以上的片段扩增可适当反应时间,不宜超过60sec/kb。
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