产品货号:
SN0047
中文名称:
热启动PCR预混液
英文名称:
2×BB Antitaq PCR Mix
产品规格:
5mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价
简要说明:
产品组成:
保存:2~8℃,有效期1年。
注意事项:
使用方法:
常见问题:
相关搜索:热启动PCR预混液,2×BB Antitaq PCR Mix
本制品包含抗体修饰的热启动BB Antitaq DNA聚合酶、dNTPs以及优化的缓冲体系,浓度为2×,只需要添加引物、模板和ddH2O即可进行PCR扩增。使用本制品扩增的PCR产物3'端带有一个突出的"A"碱基,纯化后可直接用于TA克隆。本制品适用于常规PCR、热启动PCR。
产品组成:
| 组分 | 规格 |
| 2×BB Antitaq PCR Mix | 1mL×5 |
| 说明书 | 1份 |
保存:2~8℃,有效期1年。
注意事项:
- 请使用高质量的模板进行扩增。
- PCR Mix应避免反复冻融,短期内多次使用可置于4℃保存。
使用方法:
- 按下表配制PCR反应体系(冰上操作)
成分 25μL体系 50μL体系 终浓度 2×BB Antitaq PCR Mix 12.5μL 25μL 1× 引物1 (10μM) 0.5μL 1.0μL 0.2μM 引物2 (10μM) 0.5μL 1.0μL 0.2μM 模板DNA 根据需要加入合适的量 ddH2O 至25μL 至50μL 模板推荐量:
基因组DNA:10~1000ng;
质粒DNA:1~30ng;
cDNA:1~2μL(不超过PCR反应总体积的1/10)。
以上为推荐的模板使用量,实际反应条件因模板、引物等的结构不同会存在一些差异,可根据模板、引物、目的片段的特点设定最佳反应条件,并根据比例放大或缩小反应体系。 - 建议的PCR条件
步骤 温度 时间 循环数 预变性 94℃ 2~5min 1 变性 94℃ 30s 30~35 退火 50~68℃ 30s 延伸 72℃ 1~2kb/min 终延伸 72℃ 5~10min 1 - 4℃ Hold -
常见问题:
- 扩增无产物或产物量少?
- 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板。
- 模板浓度过低。适当增加模板用量。
- 引物不合适。优化引物设计。
- 退火温度不合适。设置退火温度梯度,摸索合适的退火温度。
- 循环数过少。适当增加5~10个循环。
- 延伸时间不足。复杂模板可适当增加延伸速度至20~30s/kb。
- 模板降解或模板纯度差。电泳检测模板质量,使用高质量模板。
- 扩增出现非特异条带或弥散带?
- 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增。
- 引物浓度过高。降低引物浓度。
- 模板过量或纯度差。减少模板量,使用高质量模板。
- 退火温度过低。适当提高退火温度或使用Touchdown PCR程序。
- 循环数过多。减少循环数至25~30个循环。
- 引物特异性差。优化引物,避免非特异性条带以及引物二聚体的扩增。
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