产品货号：
RFT104
中文名称：
M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性)
英文名称：
M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H-)
产品规格：
2000U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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M-MLV反转录酶(RNase H-)是一种经过改造和优化的反转录酶。和普通的M-MLV反转录酶相比，缺失了Ribonuclease H (RNase H)酶活性，不能够选择性剪切RNA和DNA杂合双链中的RNA，可以合成长片段从DNA。
M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9～13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42～45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。
M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达。
One unit of the enzyme incorporates 1nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10min at 37℃。
活性检测条件：
50mM Tris-HCl (pH8.3),6mM MgCl2,10mM DTT,40mM KCl,0.5mM dTTP,0.4M Bq/ml [3H]-dTTP 0.4mM polyA·oligo(dT)12-18.
保存：-20℃
2000U的本产品用于体积为20μL的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
50mM Tris(pH8.3)，100mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，0.1% Triton X-100，50% glycerol。
5×RT buffer：
250mM Tris,pH8.3 at 25℃,250mM KCl,20mM MgCl2,50mM DTT。
不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
cDNA第一链合成：
相关搜索：M-MLV反转录酶(缺失RNase H活性)，MMLV反转录酶，M-MuLV反转录酶，M-MLV反转录酶(没有RNase H活性)，逆转录酶，M-MLV Reverse Transcriptase(RNase H-)
M-MLV反转录酶(RNase H-)可以合成长达9～13kb的cDNA。该反转录酶的最适反应温度为42～45℃并且在55℃时仍然有很高活性，可以避免普通的M-MLV反转录酶(RNase H-)在37℃反应时的一些不足。
M-MLV反转录酶(RNase H-)常用于在获得总RNA或mRNA后cDNA第一条链的合成。合成的cDNA第一条链后续可以用于PCR、real-time PCR、cDNA第二条链的合成等。
该反转录酶(RNase H-)由大肠杆菌表达。
One unit of the enzyme incorporates 1nmol of dTMP into a polynucleotide fraction in 10min at 37℃。
活性检测条件：
50mM Tris-HCl (pH8.3),6mM MgCl2,10mM DTT,40mM KCl,0.5mM dTTP,0.4M Bq/ml [3H]-dTTP 0.4mM polyA·oligo(dT)12-18.
| 组分 | 规格 |
| Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-，200U/μL） | 10μL |
| 5×RT buffer | 200μL |
保存：-20℃
2000U的本产品用于体积为20μL的反转录体系时足够进行10次反转录反应。
50mM Tris(pH8.3)，100mM NaCl，1mM EDTA，5mM DTT，0.1% Triton X-100，50% glycerol。
5×RT buffer：
250mM Tris,pH8.3 at 25℃,250mM KCl,20mM MgCl2,50mM DTT。
不含DNA内切酶、外切酶和磷酸酯酶和RNA酶，可以满足常规反转录合成cDNA第一条链等的需要。
70℃孵育10分钟可以导致M-MLV反转录酶(RNase H-)失活；EDTA、EGTA等螯合剂、无机磷酸盐或焦磷酸盐以及聚氨(polyamine)对该反转录酶(RNase H-)有抑制作用。
cDNA第一链合成：
- 0.2mL PCR管中配制模板/引物变性混合液：
加样顺序 成分 使用量 1 模板RNA 1ng～1μg 2 Oligo(dT)12-18primer(50μM)
or Random primer(25μM)
or Specific primer(10μM)1μL
注：Total RNA的使用量一般为1ng～1μg，mRNA的使用量一般为10pg～1μg。 - 70℃保温10分钟后迅速在冰上急冷2分钟以上。
注：此步骤是打开RNA的一些比较稳定的二级结构。 - 离心数秒钟使模板RNA/引物的变性混合液聚集于离心管底部。
- 在上述离心管中配制下列反转录反应液。
加样顺序 成分 使用量 1 模板/引物变性混合液 6μL 2 5×RT buffer 2μL 3 10mM dNTP 0.5μL 4 RNase Inhibitor(40U/μL) 0.25μL 5 M-MLV(RNase H-) 0.25～1μL 6 RNase-free水 up to 10μL
注：当起始模板RNA量＞500ng时，M-MLV（RNase H-）的使用量应＞0.25μL。 - 42℃保温1小时。
注：以Random Primers作为反转录引物时应先进行30℃，10分钟反应，然后再在42℃条件保温1小时。 - 70℃保温15分钟后冰上冷却，得到的cDNA溶液可直接用于PCR扩增，PCR扩增时cDNA溶液的使用量50μL体系加2μL。
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