产品货号:
MT3223
中文名称:
多重PCR预混液
英文名称:
2×BAPA3G Multiplex PCR Mix
产品规格:
80T|800T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品使用具有超强扩增性能的热启动BAPA3G DNA聚合酶和优化的多重PCR反应缓冲液,使其可有效扩增20重以上的PCR,具有极高的灵敏度,最大程度上减少了反应体系优化步骤。
Multiplex PCR又称多重PCR,是指在同一PCR反应体系里加上两对以上引物,同时扩增出多个核酸片段的PCR反应,已被广泛应用于科学研究和疾病诊断等多个领域,特别适用于微量样本的多位点检测。
- BAPA3G DNA聚合酶,超强扩增性能,极高抗杂质能力。
- 完全封闭的热启动特性,50℃以下100%无活性。
- 优化的反应缓冲体系,避免非特异性扩增。
- 高灵敏度,有效扩增0.1ng的人基因组DNA(20重)。
组分 | 80T | 800T |
2×BAPA3G Multiplex PCR Mix | 1mL | 1mL×10 |
说明书 | 1份 | 1份 |
保存:-20℃,有效期2年;短期频繁使用时请置于4℃可保存3个月。
- 当模板GC含量>70%时,请添加5×PCR增强剂。
- 推荐引物设计原则:引物长度保持在22~30bp,扩增产物长度在2kb以下,GC含量50%~60%,尽量减少各引物之间TM的差值。
- 检测单引物特异性:多重PCR反应前,应对设计的引物逐一扩增,以确定是否有非特异性扩增和扩增效率。
- 引物推荐使用浓度:推荐扩增片段<300bp每条引物的反应终浓度为0.2~0.3μM,扩增片段>300bp每条引物的反应终浓度为0.05~0.15μM,如某些目标片段产量偏低或偏高,可适度调整其对应引物使用量以优化反应结果。
- 反应前需将引物制成10×Primer Mix:
引物储存液 用量 10×浓度 引物1 F(100μM) 1μL 1μM 引物1 R(100μM) 1μL 1μM 引物2 F(100μM) 0.5μL 0.5μM 引物2 R(100μM) 0.5μL 0.5μM ………… 引物n F(100μM) 3μL 3μM 引物n R(100μM) 3μL 3μM ddH2O 至100μL -
- 按下表配制反应体系并混合均匀:
成分 用量 2×BAPA3G Multiplex PCR Mix 12.5μL 10×Primer Mix 2.5μL 模板DNA 0.1~100ng ddH2O 至25μL - 模板DNA推荐用量:100ng(gDNA),100pg(质粒),1~5μL(cDNA)。
- PCR扩增循环参数
步骤 温度 时间 预变性 95℃ 5min 30~35
循环95℃ 20s 57~60℃ 60s 72℃ 2kb/min 末延伸 72℃ 10min - 该制品为热启动制品预变性步骤5min不可缩短,否则DNA聚合酶无法恢复活性。
- 电泳:1kb以内的扩增产物建议使用3%~4%琼脂糖凝胶,电压使用80V,可以有效的分离各扩增片段。
图1.使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix进行20重PCR扩增;用0.1ng、1ng、10ng和100ng的人基因组分别扩增30和35个循环,4%的琼脂糖凝胶,80V电泳300min,如图所示本制品对不同量的模板具有很好的兼容性,且灵敏度可至0.1ng。 | 图2.使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix分别用不同的模板进行20重PCR扩增,泳道1-5分别为:1μL抗凝全血分离的白细胞(相当于5μL抗凝全血)、1μL抗凝全血、1μL血清、1μL含50ng human gDNA的血清和50ng human gDNA,结果显示本制品具有较强的抗杂质能力,对于全血等样品也能较好的扩增。 |
图3.使用2×BAPA3G Multiplex PCR Mix和Supplier A和Supplier B的同类产品进行15重PCR扩增,比较如下图,可见本制品扩增性能较其他同类产品具有卓越的扩增性能。 |
问题 | 解决办法 |
扩增产物少或没有扩增。 | 1.降低退火温度(每个梯度降低1℃)。 2.增加模板量 3.增加PCR循环数。 4.增加退火时间为90sec,必要时可延长退火时间至3min。 5.增加引物使用量。< |
存在非特异性扩增。 | 1.减少循环数,提高退火温度(每个梯度降低1℃)。 2.减少引物使用量。 3.重新设计引物。 |
电泳时条带模糊。 | 1.减少循环数(每次减少3个循环)。 2.减少起始模板量。 3.延长彻底延伸步骤时间至15~30min。 4.减少退火时间。 |
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