产品货号:
MT3220
中文名称:
通用型高保真PCR预混液
英文名称:
Multi-Purpose HiFi PCR Mix
产品规格:
100T|1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品为科研实验精心研制的多用途PCR扩增预混液,在扩增速度、扩增长度、扩增灵敏度、扩增产量、扩增保真度五项指标中,对应其它聚合酶和Mix比较来看,其每一项并不一定是最佳,但每一项都是顶级性能。该高保真PCR Mix综合的各项顶级性能使其成为PCR扩增独一无二的选择,常规科研实验室中,无需备用品种繁多的各类聚合酶及Mix制品,一款PCR扩增预混液即可满足科研实验室所有的需求。
本制品采用的Multi-Purpose DNA聚合酶具有5'-3'的聚合酶活性、3'-5'的外切酶活性,其保真度高于Pfu DNA聚合酶2~3倍(约为Taq酶的40倍)。扩增体系中含有独有的增强因子和缓冲系统,使其具有超高的扩增成功率。该系列制品可扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有4kb/min以上的延伸速度。
载体构建、点突变、基因合成、SNP分析、cDNA扩增、遗传突变扫描、基因克隆、转基因电泳检测等。
扩增速度:4kb/min
扩增长度:8kb(gDNA)、20kb(λDNA)
产物末端:平末端
组分 | 100T | 1000T |
2×HiFi Buffer Mix | 1mL | 1mL×10 |
Multi-Purpose DNA聚合酶(0.4U/μL) | 100μL | 1mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期2年。
- 扩增性能
图1.0.5~8kb扩增模板为gDNA复杂模板,20kb扩增模板为λ DNA模板。 图2.高GC含量模板的扩增:以人基因组DNA为模板扩增1250bp的高GC(67%)含量片段,在1xQ Solution的协助一下,可扩增0.4ng的基因组DNA模板。 - 高灵敏度扩增性能
图3.在20μL的PCR扩增体系中加入0.1~50ng的gDNA进行30个循环的PCR扩增,可见本制品可以很好的扩增出0.1ng模板,扩增片段2.2kb。 - 保真度性能
图4.使用DNA聚合酶对模板DNA进行35个循环的PCR扩增后,对PCR产物进行NGS测序。结果表明本制品的保真能力高于Taq和Pfu DNA聚合酶。
- 引物、模板、酶浓度使用参考表
在1×反应体系下 引物浓度(nM) 酶浓度(U/μL) 模板浓度(ng/μL) <2kb 200 0.02 基因组(0.01~1)
简单模板(0.01~0.1)2~4kb 100 0.03 基因组(0.05~2)
简单模板(0.01~0.1)>4kb 100 0.04 基因组(0.5~4)
简单模板(0.05~0.1) - 扩增片段GC含量>60%时,推荐添加5×PCR增强剂至1×浓度,来提升高GC含量的扩增性能。
- 按下表加入各成分配制PCR反应液
成分 用量 2×HiFi Buffer Mix 10μL Multi-Purpose DNA聚合酶(0.4U/μL) 1μL 上游引物(10μM) 0.4μL 下游引物(10μM) 0.4μL 模板DNA X μl ddH2O 至20μL - HiFi Buffer Mix包含:反应缓冲盐、dNTP、Mg2+、溴酚蓝。
- 推荐的PCR扩增程序:
过程 温度 时间 <1kb 1~2kb >2kb 预变性 95℃ 1min 1min 1min 循环1
(5个循环)95℃ 10s 10s 10s 65℃ 30s 45s 30s/kb 循环2
(23个循环)95℃ 10s 10s 10s 55℃ 10s 10s 10s 72℃ 30s 45s 30s/kb 末延伸 72℃ 2min 2min 2min - 在实际应用中,引物TM值(50~70℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环2的次数到25~28个,通常不宜超过28。
- 如果仍然不能获得良好的扩增结果,则可以改变,循环2中的退火温度为50~65℃(上表中为55℃)。
- 在实际应用中,引物TM值(50~70℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环2的次数到25~28个,通常不宜超过28。
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