产品货号:
MT3213
中文名称:
SCD DNA聚合酶
英文名称:
SCD DNA Polymerase
产品规格:
250U
发货周期:
1~3天
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SCD DNA聚合酶是一种具有强链置换活性的新型耐热DNA聚合酶。该酶具有Phi29和Bst DNA聚合酶的链置换活性和持续合成能力,并可耐受90℃的高温(短暂耐受92℃)。这些特性使得该酶成为PCDR(Polymerase Chain Displacement Reaction)的最佳用酶。此外,该酶可用于LAMP、tHDA、RCA以及NGS文库的构建。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的链置换活性、该酶无5'-3'的外切酶活性,扩增速度为2kb/min、在70℃具有最佳活性。
SCD DNA聚合酶采用了独特的电子重构架技术,提高了该酶对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚的耐受性。
1U指在70℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
等温扩增、LAMP、热变性LAMP、tHDA和RCA、PCDR、全基因组测序、单细胞测序、NGS文库构建。
组分 | 规格 |
SCD DNA聚合酶(10U/μL) | 25μL |
5×SCD Pol Buffer | 1.25mL×2 |
100mM Mg2+ | 1mL |
保存:-20℃,有效期2年。
1×SCD Pol Buffer中包含2mM Mg2+、4%甘油及其它缓冲盐。
图1.以不同数量级的P72质粒为模板进行PCR和PCDR扩增,引物分别为Inner Primer,Out Primer,Inner+Out Primer,产物1为Out Primer F/R(248bp),产物2为Inner Primer F/Out Primer R(200bp),产物3为OuT Primer F/Inner Primer R(164bp),产物4为Inner Primer F/Inner Primer R(111bp),1-5分别为10e5/10e4/10e3/10e2/10的P72质粒,Marker为DNA Marker 10,000。说明:应用SCD DNA聚合酶采用四引物的PCDR的灵敏度为标准PCR的10倍左右。
一、PCDR的扩增应用
- 反应体系:
成分 用量 5×SCD Pol Buffer 5μL SCD DNA聚合酶(10U/μL) 0.05μL dNTP Mixture (10mM each) 0.5μL Inner Primer each (10μM) 0.25μL Out Primer each (10μM) 0.25μL 模板DNA x μL ddH2O 至25μL - 在PCDR扩增时,SCD DNA聚合酶的使用浓度为0.02U/μL,必要时可在0.02~0.04U/μl之间调整。
- PCDR扩增循环参数
循环数 温度 时间 1st Cycle 92℃ 30s 25-35 Cycles 90℃ 10s 50~60℃ 10s 70℃ 2kb/min Last Cycle 70℃ 2min - SCD DNA聚合酶的耐热性低于常规的Taq酶和pfu酶,该酶在92℃以上的温度会逐步失活,因此在PCDR的扩增中,第一步的预变性时间不超过1min(推荐参数为30s),过长的时间会导致酶活大幅下降。
二、LAMP扩增应用
- 反应体系:
成分 用量 5×SCD Pol Buffer 5μL 100mM Mg2+ 1μL SCD DNA聚合酶(10U/μL) 1μL dNTP Mixture (10mM each) 3μL 10×LAMP Primer 2.5μL 模板DNA x μL ddH2O 至25μL - 10×LAMP Primer:16μM FIP/BIP;4μM LPF/B;2μM F3/B3。
- 在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时,推荐的酶浓度为0.4U/μl,通常可以在0.2~0.8U/μl之间调整。
- 1×SCD Pol Buffer含2mM Mg2+,在LAMP扩增中,再额外补充4mM Mg2+。
- 10×LAMP Primer:16μM FIP/BIP;4μM LPF/B;2μM F3/B3。
- LAMP扩增参数
过程 变性后恒温扩增 恒温扩增 预变性 92℃ 30s 无 恒温扩增 70℃ 30~60min - 在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时,由于SCD酶的耐热性远高于Bst系列的聚合酶,因此允许在恒温扩增前,采用高温(92℃)下的变性步骤。这一特性有助于粗样本的裂解,更有效的释放核酸。
- 在恒温扩增阶段,通常建议的反应温度为70℃,必要时可在65~72℃间调整。
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