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SCD DNA聚合酶图片
产品货号:
MT3213
中文名称:
SCD DNA聚合酶
英文名称:
SCD DNA Polymerase
产品规格:
250U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

SCD DNA聚合酶是一种具有强链置换活性的新型耐热DNA聚合酶。该酶具有Phi29和Bst DNA聚合酶的链置换活性和持续合成能力,并可耐受90℃的高温(短暂耐受92℃)。这些特性使得该酶成为PCDR(Polymerase Chain Displacement Reaction)的最佳用酶。此外,该酶可用于LAMP、tHDA、RCA以及NGS文库的构建。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、5'-3'的链置换活性、该酶无5'-3'的外切酶活性,扩增速度为2kb/min、在70℃具有最佳活性。


SCD DNA聚合酶采用了独特的电子重构架技术,提高了该酶对乙醇、胍盐、肝素、血清、植物多糖多酚的耐受性。




1U指在70℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。


等温扩增、LAMP、热变性LAMP、tHDA和RCA、PCDR、全基因组测序、单细胞测序、NGS文库构建。


组分规格
SCD DNA聚合酶(10U/μL)25μL
5×SCD Pol Buffer1.25mL×2
100mM Mg2+1mL

保存:-20℃,有效期2年。


1×SCD Pol Buffer中包含2mM Mg2+、4%甘油及其它缓冲盐。


SCD DNA聚合酶
图1.以不同数量级的P72质粒为模板进行PCR和PCDR扩增,引物分别为Inner Primer,Out Primer,Inner+Out Primer,产物1为Out Primer F/R(248bp),产物2为Inner Primer F/Out Primer R(200bp),产物3为OuT Primer F/Inner Primer R(164bp),产物4为Inner Primer F/Inner Primer R(111bp),1-5分别为10e5/10e4/10e3/10e2/10的P72质粒,Marker为DNA Marker 10,000。说明:应用SCD DNA聚合酶采用四引物的PCDR的灵敏度为标准PCR的10倍左右。


一、PCDR的扩增应用
  • 反应体系:
    成分用量
    5×SCD Pol Buffer5μL
    SCD DNA聚合酶(10U/μL)0.05μL
    dNTP Mixture (10mM each)0.5μL
    Inner Primer each (10μM)0.25μL
    Out Primer each (10μM)0.25μL
    模板DNAx μL
    ddH2O至25μL
    • 在PCDR扩增时,SCD DNA聚合酶的使用浓度为0.02U/μL,必要时可在0.02~0.04U/μl之间调整。
  • PCDR扩增循环参数
    循环数温度时间
    1st Cycle92℃30s
    25-35 Cycles90℃10s
    50~60℃10s
    70℃2kb/min
    Last Cycle70℃2min
    • SCD DNA聚合酶的耐热性低于常规的Taq酶和pfu酶,该酶在92℃以上的温度会逐步失活,因此在PCDR的扩增中,第一步的预变性时间不超过1min(推荐参数为30s),过长的时间会导致酶活大幅下降。


二、LAMP扩增应用
  • 反应体系:
    成分用量
    5×SCD Pol Buffer5μL
    100mM Mg2+1μL
    SCD DNA聚合酶(10U/μL)1μL
    dNTP Mixture (10mM each)3μL
    10×LAMP Primer2.5μL
    模板DNAx μL
    ddH2O至25μL
    • 10×LAMP Primer:16μM FIP/BIP;4μM LPF/B;2μM F3/B3。
    • 在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时,推荐的酶浓度为0.4U/μl,通常可以在0.2~0.8U/μl之间调整。
    • 1×SCD Pol Buffer含2mM Mg2+,在LAMP扩增中,再额外补充4mM Mg2+
  • LAMP扩增参数
    过程变性后恒温扩增恒温扩增
    预变性92℃ 30s
    恒温扩增70℃ 30~60min
      在使用SCD DNA聚合酶进行LAMP扩增时,由于SCD酶的耐热性远高于Bst系列的聚合酶,因此允许在恒温扩增前,采用高温(92℃)下的变性步骤。这一特性有助于粗样本的裂解,更有效的释放核酸。
    • 在恒温扩增阶段,通常建议的反应温度为70℃,必要时可在65~72℃间调整。

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