产品货号:
MT3203
中文名称:
2×超高保真PCR预混液
英文名称:
2×G5S Plus HiFi PCR Mix
产品规格:
100T|1000T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品使用的G5S Plus High-Fidelity DNA Polymerase融合Q5和Q5U的性能于一体,使其成为一酶多用的全能选手。该酶来源于高保真DNA聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有超保真性能(与Q5同水平)、长片段扩增能力、高产量、dUTP渗入能力、扩增含有尿嘧啶模板的能力。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有4kb/min以上的延伸速度。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、强3'-5'的外切酶活性,产物为平末端。
- 以λDNA为模板,扩增20kb DNA片段;
- 以人类基因组DNA为模板,扩增8kb DNA片段。
组分 | 100T | 1000T |
2×HiFi Buffer | 1mL | 1mL×10 |
G5S Plus DNA聚合酶(2U/μL) | 20μL | 200μL |
保存:-20℃,有效期2年。
- 2×HiFi Buffer包含反应缓冲盐、dNTP、Mg2+、溴酚蓝等。
- 引物、模板、酶浓度使用参考表
在1×反应
体系下引物浓度
(nM)酶浓度
(U/μL)模板浓度
(ng/μL)<2kb 200 0.02 基因组(0.01~1)
简单模板(0.01~0.1)2~4kb 100 0.03 基因组(0.05~2)
简单模板(0.01~0.1)>4kb 100 0.04 基因组(0.5~4)
简单模板(0.05~0.1) - 扩增片段GC含量>60%时,推荐添加5×PCR增强剂(货号:MT0034)至1×浓度,来提升高GC含量的扩增性能。
- 按下表加入各成分配制PCR反应体系:
成分 用量 2×HiFi Buffer 10μL G5S Plus DNA聚合酶(2U/μL) 0.2μL 上游引物(10μM) 0.4μL 下游引物(10μM) 0.4μL 模板DNA X μL ddH2O 至20μL - 推荐的万能PCR扩增程序
步骤 温度 时间 <1kb 1~2kb >2kb 预变性 95℃ 1min 1min 1min 循环1
(5个循环)95℃ 10s 10s 10s 65℃ 30s 45s 30s/kb 循环2
(23个循环)95℃ 10s 10s 10s 55℃ 10s 10s 10s 72℃ 30s 45s 30s/kb 终延伸 72℃ 2min 2min 2min - 在实际应用中,引物TM值(50~70℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环2的次数到25~28个,通常不宜超过28。
- 如果仍然不能获得良好的扩增结果,则可以改变,循环2中的退火温度为50~65℃(上表中为55℃)。
- 在实际应用中,引物TM值(50~70℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环2的次数到25~28个,通常不宜超过28。
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