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G5S Plus超高保真DNA聚合酶图片
产品货号:
MT3201
中文名称:
G5S Plus超高保真DNA聚合酶
英文名称:
G5S Plus HiFi DNA Polymerase
产品规格:
100U|1000U
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

G5S Plus超高保真DNA聚合酶来源于高保真DNA聚合酶,并加入了增强的延伸结构,使其具有超保真性能、长片段扩增能力、高产量、dUTP渗入能力、扩增含有尿嘧啶模板的能力。使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λDNA。该酶具有4kb/min的延伸速度。该酶具有5'-3'的聚合酶活性、强3'-5'的外切酶活性,产物为平末端。




许多有高保真功能的聚合酶来为B型DNA聚合酶,在遇到DNA模板中的尿嘧啶碱基时停止复制。G5S Plus删除了尿嘧啶结合域,使其能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板,该性能赋予其独特的“U”特征。其有两个重要的应用方向:
  • 用于超保真扩增重亚硫酸氢盐转化、脱氨基、或受损DNA;
  • 在超保真扩增中搭配dUTP和热敏UDG,用于防止PCR体系中携带污染。除此外,也多用于USER克隆。



  • 超保真扩增:与Q5 DNA聚合酶同水平的保真性能,是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
  • 识别dUTP底物:能够读取和扩增含有尿嘧啶的模板,具有“U”特征。
  • 防污染扩增:在PCR扩增中可以使用dUTP完全替代dTTP,建立防污染高保真扩增。
  • 快速扩增:具有4kb/min的扩增能力。
  • 长片段扩增:质粒、λDNA等简单模板>20kb,复杂基因组模板>8kb。



一个活力单位即在72℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。


组分100U1000U
G5S Plus DNA Polymerase(2U/μL)50μL500μL
5×G5S Buffer11.25mL15mL
5×G5S Buffer21.25mL1.25mL

保存:-20℃,有效期2年。


10mM Tris-HCl(pH7.6),100mM NaCl,0.05% Tween20,1mM DTT,0.5mM EDTA,50%甘油。


  • G5S Buffer 1用于4kb以下的片段扩增,及多重扩增,Buffer 1总能获得更特异的单一条带。
  • G5S Buffer 2是高产PCR和复杂模版扩增的专用Buffer,用于4kb以上片段扩增,在扩增良好的引物条件下,Buffer 2总能获得更高的产量。



  • 引物、模板、酶浓度使用参考表
    在1×反应
    体系下
    引物浓度
    (nM)
    酶浓度
    (mU/μL)
    模板浓度
    (ng/μL)
    <4kb20020基因组(0.01~1)
    简单模板(0.01~0.1)
    >4kb10020~40基因组(0.05~4)
    简单模板(0.01~0.1)
  • 在进行防污染扩增时,dNTP中的dTTP可用dUTP来代替,dUTP占比75~100%。该酶可以用dUTP完全取代dTTP,扩增效率有所下降,但通常不影响下游应用(建议扩增片段<1kb)。在防污染扩增时,通常需要搭配热敏UDG酶来实现污染物的去除,热敏UDG的使用浓度通常为(0.01~0.05U/μL)。
  • 扩增片段GC含量>65%时,推荐添加5×PCR增强剂至1×浓度,来提升高GC含量的扩增性能。
  • 1×G5S Buffer 1和2,含有1.5mM Mg2+,必要情况下可调整用量。



  • 按下表配制PCR反应液
    成分用量终浓度
    5×G5S Buffer4μL
    G5S Plus DNA Polymerase(2U/μL)0.2μL20mU/μL
    dNTP Mixture (10mM each)0.4μL200μM
    上游引物(10μM)0.4μL200 nM
    下游引物(10μM)0.4μL200 nM
    模板DNAX μL
    ddH2O至20μL

  • 推荐的PCR扩增程序
    过程温度不同长度的模板DNA片段的时间参数
    <0.5kb<1kb1~2kb2~3kb>3kb
    预变性95℃1min1min1min1min1min
    循环1
    (5个循环)
    95℃10s10s10s10s10s
    65℃15s30s45s90s2kb/min
    循环2
    (23个循环)
    95℃10s10s10s10s10s
    55℃10s10s10s10s10s
    72℃15s30s45s90s2kb/min
    终延伸72℃1min1min1min1min1min

    • 在实际应用中,引物TM值(50~70℃)范围内均获得良好的扩增。该程序扩增总循环数为28(5+23),如产物扩增亮度不足,则增加循环2的次数到25~28个,通常不宜超过28。
    • 如果仍然不能获得良好的扩增结果,则可以改变,循环2中的退火温度为50~65℃(上表中为55℃)。



  • 不同长度片段的扩增图(最高到20kb)
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    G5S Plus扩增性能展示:500bp~8kb是以gDNA为模板进行扩增,15~20kb是以λDNA为模板进行扩增。酶的使用浓度为:0.02~0.04U/μL。
  • 不同酶用量的扩增性能
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    以λDNA为模板(40pg/μL)扩增1kb的片段,在0.01U/μL的酶浓度下即可有效扩增。
    以gDNA为模板(2ng/μL)扩增5kb的片段,在0.02U/μL的酶浓度下即可有效扩增。
  • 模板扩增灵敏度展示
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    A.以gDNA为模板扩增500bp的产物,该酶可扩增低至10pg的gDNA(约3~5个细胞)
    B.以gDNA为模板扩增2kb的产物,该酶可扩增低至100pg的gDNA(约30~40个细胞)。
    酶的工作浓度为0.04U/μL。
  • GC-rich模板的扩增
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    以人基因组DNA为模板扩增1250bp的高GC(67%)片段,在1×PCR增强剂的条件下,可扩增低至2ng的模板,酶的工作浓度为0.02U/μL。
  • dUTP模板扩增性能
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    重硫酸盐处理DNA后,未发生甲基化的C碱基转化为U碱基,G5S Plus可用于高保真扩增DNA甲基化实验,扩增产物为500bp,酶的工作浓度为0.04U/μL。
  • 高保真度扩增性能
    G5S Plus超高保真DNA聚合酶
    使用DNA聚合酶对模板DNA进行35个循环的PCR扩增后,对PCR进行NGS测序,结果表明G5S Plus与Q5 DNA聚合酶保真度相当。

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