产品货号:
MT3111
中文名称:
热启动LAMP扩增试剂盒(SYBR染料法)
英文名称:
HotStart DNA/RNA SYBR Green LAMP Kit
产品规格:
200T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒基于性能卓越的热启动Bst4.3 DNA/RNA聚合酶,用于模板DNA或RNA的染料法实时荧光LAMP恒温扩增反应,试剂盒中的5×IsoAmpMix包含了dNTP、Mg2+、反应缓冲盐,不含甘油。
- Bst4.3包含热启动Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>90%,在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
- 反应温度提升到70℃,大幅降低引物Dimer的形成,提高扩增特异性,并使得粗样品核酸释放更加充分;
- 包含解旋因子Uver,因此,允许在不使用F3/B3引物的情况下进行eLAMP扩增(easy LAMP),并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。
组分 | 规格 |
5×IsoAmpMix | 1mL |
热启动Bst4.3 DNA/RNA聚合酶(16U/μL) | 100μL |
250×SYBR Green | 25μL |
保存:-20℃,有效期1年。
本试剂盒反复冻融10次不影响性能,但应避免反复冻融;制品一经融化推荐置于2~8℃保存,在此条件下制品稳定储存1个月。
- Bst4.3聚合酶在用于LAMP扩增时的推荐反应温度为70℃。由于Uver的反应温度为70℃,因此该酶在65℃扩增时,性能会大幅下降。
- 制品中包含高浓度的盐组分,使用时做好个人防护,防止制品与皮肤、眼、鼻、呼吸道等接触和吸入,一旦接触或吸入,请用大量的清水冲洗。
- 防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
- 在进行SYBR Green实时荧光LAMP时,取20μL的250×SYBR Green加入到1mL的5×IsoAmpMix中,即可用于后续测试(请注意在管上做好标记,已加入SYBR Green)。250×SYBR Green溶剂为DMSO,在常温以下为固态,可于37℃下彻底融化后使用。加入SYBR Green后的5×IsoAmpMix可于-20℃下保存12个月。
- 本试剂盒不仅可用于常规检测,对于具有冻干经验的研究者,在加入冻干保护剂后,可用于后续冻干。
- 10×LAMP Primer Mix的配制:
标准LAMP eLAMP FIP/BIP 16μM each 8~16μM each LF/LB 4~8μM each 4~8μM each F3/B3 2μM each 非必须 - eLAMP(easy LAMP)为去除F3/B3引物的方法,为Bst4.3-3.2系列专用的使用策略,对于大多数引物组,在Uver的加持下,扩增速度几乎不受影响。
- 配制LAMP反应体系:
成分 用量 5×IsoAmpMix 5μL 10×LAMP Primer Mix 2.5μL 热启动Bst4.3 DNA/RNA聚合酶(16U/μL) 0.25~0.5μL 模板DNA/RNA X μL ddH2O 至25μL - 关于Bst酶的用量,对于绝大多数的LAMP扩增来讲,0.16~0.32U/μl的浓度,均可获得理想的扩增结果,必要情况下进行其它调整。
- 扩增反应:反应体系配好后,置于70℃反应20~40min。
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