产品货号:
MT3106
中文名称:
热启动LAMP扩增预混液冻干球(HNB显色)
英文名称:
HotStart DNA/RNA HNB LAMP Bead
产品规格:
100T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是用于模板DNA或RNA的LAMP扩增反应冻干微球制剂,包含了热启动Bst4.3 DNA/RNA聚合酶、解旋因子Uver、dNTP、Mg2+、反应缓冲、HNB变色指示剂、其它稳定剂,单粒扩增体系为25μL。
本制品中的特制的HNB染料在反应起始前与Mg2+结合产生深紫罗兰色,随着LAMP反应的进行,产生的PPi(无机焦磷酸盐)结合体系中的Mg2+,使得HNB显示出淡绿色。
(HNB-Mg2+复合物) | → (PPi-Mg2+)+ | (HNB) |
深紫罗兰色 | 淡绿色 |
组分 | 规格 |
HotStart DNA/RNA HNB LAMP Bead | 100粒 |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃干燥密封,有效期2年。室温密封防潮可稳定保存1年。
- 本制品包含热启动Aptamer,该配体确保酶在<30℃时,酶活封闭效率>95%,在>60℃时1min内完全释放酶活。该特性利于室温建立反应体系,并大幅降低了低温条件下的非特异扩增;
- 本制品包含独特的解旋因子Uver,因此,允许在不使用F3/B3引物的情况下进行LAMP扩增(easy LAMP),并允许FIP/BIP的引物用量降低一倍。这将进一步降低非特异扩增,并使得扩增均一性大幅提升。
- Bst4.3 DNA/RNA聚合酶在用于LAMP扩增时的推荐反应温度为65~70℃,最佳反应温度为70℃。由于Uver的反应温度为70℃,因此在进行eLAMP扩增时,反应温度设置为70℃,大幅降低引物Dimer的形成,提高扩增特异性,并使得粗样品核酸释放更加充分;
- 本制品在1×浓度情况下,对如下试剂的耐受度:
试剂 耐受浓度 Tris-HCl(pH8.0) ≤10mM NaOH ≤1mM Tween20% ≤1% EDTA(pH8.0) ≤20μM 肝素 ≤0.5 IU/mL - HNB变色指示剂是还原状态下的染料,任何强氧化剂(H2O2、次氯酸钠等)均会破坏HNB变色指示剂的结构,从而直接导致试剂变为深蓝绿色。
- 防止气溶胶污染,尽可能进行分区操作。
- 10×LAMP Primer Mix制备:
本试剂既可以用于标准LAMP扩增,也可以用于eLAMP扩增。- 10×标准LAMP Primer Mix:
FIP/BIP=16μM each;LF/LB=4μM each;F3/B3=2μM each - 10×eLAMP Primer Mix:
FIP/BIP=8μM each;LF/LB=4μM each- eLAMP(easy LAMP)为去除F3/B3引物的方法,为Bst4.3专用的使用策略,对于大多数引物组,在Uver的加持下,扩增速度几乎不受影响。如引物扩增效率低,可提高FIP/BIP浓度到12~16μM。
- 10×标准LAMP Primer Mix:
- 配制LAMP反应体系:
成分 用量 HotStart DNA/RNA HNB LAMP Bead 1粒 10×LAMP Primer Mix 2.5μL 模板DNA/RNA X μL ddH2O 至25μL - LAMP扩增程序:
反应体系配好后,按下表条件反应20~30min。标准LAMP扩增 eLAMP扩增 65~70℃均可 70℃反应 - 结果判定:反应完毕后观察颜色,紫色为阴性,绿色为阳性扩增。
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