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LAMP扩增预混液冻干球(低盐)，即RNA/DNA LAMP Low-Salt Bead，是用于LAMP扩增反应的冻干微球制剂，内含恒温扩增所用的低盐缓冲盐、Mg²⁺、dNTP、Bst 4.0 DNA/RNA聚合酶等。由于LAMP在反应时会产生大量的H⁺，导致反应体系pH下降，因此，低缓冲盐体系条件下，可搭配pH敏感染料实现可视化检测LAMP检测。该制品中包含低浓度的Tris（pH8.8）缓冲盐。

• 红黄变色反应依赖于反应体系中pH的变化来实现，因此模板中Tris盐、NaOH等成分对反应有至关重要的影响。在采用核酸纯化的样本检测时，推荐使用ddH2O进行洗脱。
  
• 关于DEPC水使用的特殊说明：由于DEPC处理过的ddH2O显示很强的酸性，会直接导致溶解后的冻干球成黄色。所以DEPC处理过的H2O必须经NaOH溶液调整pH到8.0-9.0后方可使用。我们推荐直接使用，水机制备的18.2Ω H2O，不影响RNA样本的扩增。
  
• 在对粗制样本进行检测时，最佳的粗制样本为拭孖样本，拭孖样本经ddH2O浸泡后，可以直接使用浸泡液作为模板进行扩增，无需核酸纯化步骤。
  
• 关于LAMP成品试剂的建议，RNA/DNA LAMP Low-Salt Bead和pH指示剂ROY染料管(可自行烘干制备)均为室温稳定状态，可长期保存。将扩增引物与pH指示剂ROY混合后，于70℃烘干，再加入一粒冻干球即可制备成全体系检测试剂。

• 配制反应体系
  

  成分	用量
  RNA/DNA LAMP Low-Salt Bead	1粒
  10×Red pHIndicator ROY	2.5μL
  10×LAMP Primer Mix	2.5μL
  模板DNA/RNA	X μL
  ddH2O	至25μL

  • 10×LAMP Primer Mix的配制，FIP/BIP分别为16μM、LoopF/B分别为4～8μM、F3/B3分别为2μM。引物的稀释液均使用ddH2O（pH8.0～9.0），不能使用含有Tris缓冲盐系统。由于该变色方法对pH敏感，多数情况下引物溶解后成酸性，因此在10x引物中加入终浓度1mM NaOH使引物恢复到中性pH（~8.5），注意NaOH需新鲜配制，可配制成50～100mM浓度使用。
• 盖上管盖，置于65℃进行反应20～30min。
  
• 肉眼观察结果，黄色为阳性，红色为阴性。