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本试剂盒基于Bst2.0 DNA聚合酶，是以DNA模板LAMP等温扩增反应的绝佳试剂，此外，本试剂盒还可以用于其它恒温扩增实验，包括CPA、SMAP等。

• Bst2.0 DNA Polymerase中含22%海藻糖，不含甘油，因此可用于建立LAMP引物mix与酶制品的冻干品，以提高LAMP检测制品的稳定性和易用性。
  
• 对成功建立LAMP检测方法至关重要的四个参数分别是：引物位置、引物使用浓度、反应温度（60～65℃）和反应时间。引物使用浓度、反应温度是优先要确认的参数，如经过参数调整后仍不能达到检测用标准，则重新设计引物组合，再进行测试。
  
• 在用于其它恒温扩增反应时（如CPA、SMAP等），可参考如下LAMP扩增策略进行，反应时间可能会需要调整。
  
• 关于矿物油的使用，在配制完LAMP反应体系后，可加入一滴矿物油覆盖于反应液上部，以减少气溶胶的污染。

• 按下表向0.2mL EP反应管中加入各成分配制反应体系
  

  成分	用量
  2×IsoAmp Buffer	10μL
  Bst2.0 DNA Polymerase	2.5μL
  10×LAMP Primer Mix	2μL
  模板DNA	X μL
  ddH2O	至20μL

  • 10×LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP 16μM each、LoopF/B 4μM each、F3/B3 2μM each。
• 充分混匀并短暂离心，置于60～68℃进行反应，连接LAMP实时浊度仪，对浊度变化进行实时检测。也可肉眼分别于30min、45min、60min观察浊度变化。必要情况下85℃热失活5min（可选）。

• 配制LAMP反应体系
  
  • 按下表向0.2mL EP反应管中加入各成分配制反应体系
    

    成分	用量
    2×IsoAmp Buffer	10μL
    Bst2.0 DNA Polymerase	2.5μL
    10×LAMP Primer Mix	2μL
    模板DNA	X μL
    ddH2O	至20μL

    • 10×LAMP Primer Mix浓度：FIP/BIP 16μM each、LoopF/B 4μM each、F3/B3 2μM each。
      
    • 首次实验时LAMP Primer Mix分别采用1、1.5、2μL，以阴性不变色，阳性样品正常变色为准，作为后续测试用量。
  • 全部试剂加入完毕后，轻弹EP管底部后，再盖上OTG橙绿变色管。
    
    • 盖上管盖后务必不能再剧烈混合与倒置，以防止将管盖上的OTG染料溶解，OTG染料一旦混入反应液中将会终止LAMP反应。
• 反应体系配好后，置于60～68℃（首次实验采用65℃）进行反应20～45min。（扩增良好的引物组合，通常25min即可变色，一般不超过45min，首次实验设置20、25、30、45min）。
  
• 观察结果：观察结果时，尽可能不要与配制反应空间共用，以防止污染操作台。将反应EP管倒置，并手腕轻甩，反应液浸泡EP管盖上的OTG染料，静置30s。再将EP反应管正置，并轻甩反应液到EP管底部，此时扩增样品将变为鲜艳肉眼可见绿色，而阴性未发生扩增的管将为深橙色。