产品货号：
MT2380
中文名称：
Bst DNA聚合酶(大片段)
英文名称：
Bst DNA Polymerase, Large Fragment
产品规格：
1600U
发货周期：
已停产
产品价格：
已停产
Bst DNA聚合酶(大片段)具有5'→3' DNA聚合酶活性，不具有3'→5'和5'→3'的核酸外切酶活性。Bst DNA Polymerase,Large Fragment具有很强的链置换(strand displacement)能力，可应用于核酸的等温扩增反应，如环介导的等温扩增(Loop-mediated isothermal amplification,LAMP)和滚环扩增(Rolling-circle amplification,RCA)等。
Bst DNA聚合酶(大片段)介导的等温扩增温度一般在50～68℃之间，通常为65℃。与Bst DNA Polymerase 2.0相比，本产品在进行等温扩增时不具有将dUTP掺入合成的DNA链的能力。
Bst DNA Polymerase具有5'→3'的核酸外切酶活性，而Bst DNA聚合酶(大片段)通过删除突变而缺失了5'→3'核酸外切酶活性。
Bst DNA聚合酶(大片段)进行环介导等温扩增反应的效果。
使用本产品或N公司的Bst DNA Polymerase,Large Fragment，在25μL体系，分别以不同量的(10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,10-9ng)烟草花叶病毒的CaMV35启动子为模板，8U的Bst DNA Polymerase,Large Fragment (图1中简写为Bst)，引物：1.6μM FIP/BIP、0.2μM F3/B3、0.4μM LoopF/B，1.4mM dNTP each，在1×Bst Reaction Buffer中补加MgSO4至终浓度为8mM，65℃孵育1h，80℃加热20min灭活，然后进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司的竞品相比，具有略好或至少相当的酶活性效果。
保存：-20℃
10mM Tris-HCl(pH7.5)，50mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.1% Triton X-100，50% (v/v) glycerol。
一个单位是指在65℃下30分钟内将10nmol dNTP掺入酸不溶性物所需的酶量。
Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I的大片段通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。
无DNA内切酶和外切酶活性。
10×Bst Reaction Buffer：
200mM Tris-HCl，100mM KCl，100mM (NH4)2SO4，20mM MgSO4，1% Triton X-100，pH8.8 at 25℃。
80℃加热20分钟。
相关搜索：Bst DNA聚合酶(大片段)，大片段Bst DNA聚合酶，Bst DNA Polymerase, Large Fragment
Bst DNA聚合酶(大片段)介导的等温扩增温度一般在50～68℃之间，通常为65℃。与Bst DNA Polymerase 2.0相比，本产品在进行等温扩增时不具有将dUTP掺入合成的DNA链的能力。
Bst DNA Polymerase具有5'→3'的核酸外切酶活性，而Bst DNA聚合酶(大片段)通过删除突变而缺失了5'→3'核酸外切酶活性。
Bst DNA聚合酶(大片段)进行环介导等温扩增反应的效果。
使用本产品或N公司的Bst DNA Polymerase,Large Fragment，在25μL体系，分别以不同量的(10-1,10-2,10-3,10-4,10-5,10-6,10-7,10-8,10-9ng)烟草花叶病毒的CaMV35启动子为模板，8U的Bst DNA Polymerase,Large Fragment (图1中简写为Bst)，引物：1.6μM FIP/BIP、0.2μM F3/B3、0.4μM LoopF/B，1.4mM dNTP each，在1×Bst Reaction Buffer中补加MgSO4至终浓度为8mM，65℃孵育1h，80℃加热20min灭活，然后进行1.5%的琼脂糖凝胶电泳检测。如图所示，本产品与N公司的竞品相比，具有略好或至少相当的酶活性效果。
- 环介导等温扩增LAMP、解旋酶等温基因扩增(HDA)等DNA等温扩增；
- 多重置换扩增(MDA)；
- 全基因组扩增(WGA)；
- 高GC含量DNA的测序；
- 纳克级DNA模板的快速测序，建库测序等。
| 组分 | 1600U |
| Bst DNA聚合酶(大片段，8U/μL) | 100μL×2 |
| 10×Bst Reaction Buffer | 300μL×2 |
| 100mM MgSO4 | 200μL×2 |
保存：-20℃
10mM Tris-HCl(pH7.5)，50mM KCl，0.1mM EDTA，1mM DTT，0.1% Triton X-100，50% (v/v) glycerol。
一个单位是指在65℃下30分钟内将10nmol dNTP掺入酸不溶性物所需的酶量。
Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I的大片段通过大肠杆菌重组表达和纯化而获得。
无DNA内切酶和外切酶活性。
10×Bst Reaction Buffer：
200mM Tris-HCl，100mM KCl，100mM (NH4)2SO4，20mM MgSO4，1% Triton X-100，pH8.8 at 25℃。
80℃加热20分钟。
- Bst DNA聚合酶(大片段)不具有3'→5'核酸外切酶活性。
- 建议等温扩增反应温度不能高于70℃，否则会导致酶失活。
- Bst DNA聚合酶(大片段)不能用于热循环测序和PCR。
- 每次等温扩增实验注意设置无模板DNA作为阴性对照。
- 引物设计：
环介导的等温扩增引物的设计可以参考http://primerexplorer.jp/e/，建议使用V5版本。具体操作手册可以在http://primerexplorer.jp/e/v5_manual/index.html下载。环介导等温扩增引物的初步筛选可参照该操作手册，具体需要通过实验来验证比较合适的引物。LAMP引物由4个或6个(含Loop)引物组成，建议加入Loop环引物设计，即设计6条引物进行实验。 - 以LAMP等温扩增为例，参考下表设置反应体系。
成分 用量 终浓度 Nuclease-Free Water (13.5-x)μl - 10X Bst Reaction Buffer 2.5μL 1X MgSO4 (100mM) 1.5μL 6mM (8mM total) dNTP (10mM each) 3.5μL 1.4mM each FIP/BIP Primers (25X,40μM) 1μL 1.6μM F3/B3 Primers (25X,5μM) 1μL 0.2μM LoopF/B Primers (25X,10μM) 1μL 0.4μM Template xμl ＞10 copies or more Bst DNA聚合酶(大片段，8U/μL) 1μL 320U/ml 总体积 25μL -
注意：- 在配制反应体系完成后，可每25μL体系的反应管管盖加适量高浓度的SYBR Green I 1μL，待等温扩增反应结束后，8000g离心1min，反应体系变荧光绿为阳性，保持无色或棕色为阴性。也可以无需添加指示剂，待反应程序结束后，可见反应液明显变浑浊为阳性，反应液保持透明为阴性。
- 如需优化反应，可调整Mg2+浓度(4～10mM)，酶量(0.04～0.32U/μl)或改变反应温度(50～68℃)。
- 如果通过琼脂糖凝胶电泳或其它需要打开LAMP反应容器的方法进行分析，请设置辅助分析区域和设备，以避免污染。
- 由于反应比较迅速，为了确保实验的重现性，建议模板DNA最后加入。
- 强烈建议设置未加模板的阴性对照，以确保扩增的特异性。
- 为了防止在配置试剂时发生污染，请务必在超净工作台内进行操作。
- 试剂及模板DNA的配置操作尽量需要和PCR产物的电泳等分析在不同的区域进行，以免发生污染。
- 在配制反应体系完成后，可每25μL体系的反应管管盖加适量高浓度的SYBR Green I 1μL，待等温扩增反应结束后，8000g离心1min，反应体系变荧光绿为阳性，保持无色或棕色为阴性。也可以无需添加指示剂，待反应程序结束后，可见反应液明显变浑浊为阳性，反应液保持透明为阴性。
- 反应程序：65℃ 60min。
- 灭活：80℃ 20min。
- 如实验需要，可以用1.5%的琼脂糖凝胶进行电泳分析，电泳图显示扩增产物为梯度条带为阳性，无梯度条带为阴性。
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