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本制品是采用SYBR Green嵌合荧光法进行Real-Time PCR预混液，将化学修饰的热启动BAPA3G DNA聚合酶、反应Buffer、dNTP、SYBR Green染料等试剂预混在一起。本制品配有单独的ROX内参染料，可用于需要ROX进行孔间校正的定量PCR仪。

本预混液采用电子进化改造的第三代DNA聚合酶，其对杂质的耐受性能明显提升，包括乙醇、胍盐、肝素、SYBR Green染料、MLV，因此无论采用基因组DNA、反转录cDNA、纯度欠佳的核酸样本都具有理想的扩增效果。优化的反应Buffer和100%热启动性能，确保该试剂在信噪比、循环域值、线性度和灵敏度方面具有绝佳的性能。

• 杂质高耐受性，使用各种gDNA和cDNA，具有最佳的扩增成功率。
  
• 高灵敏度，宽范围的动态检测（>7个数量级）。
  
• 反应效率在95～110%之间，高准确度和重现性。
  
• 扩增程序40min内完成，具有10s扩增1kb的快速能力。
  
• 在不同的富含AT和GC目标物上产生更高的荧光检测。

• 根据PCR仪型号选择步骤a或b配制反应体系
  
  • 需要添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-TimePCR仪，包括：ABI PRISM7900HT,7300/7500/7500 Fast Real-Time PCR (Applied Biosystems)；Mx3000P(Stratagene)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系：
    

    成分	用量	终浓度
    2×BAPA3G SYBR qPCR Mix	10μL	1×
    50×ROX Reference Dye	0.4μL	1×
    正向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
    反向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
    DNA模板	0.5～2μL	-
    ddH2O	至20μL	-

    • 引物用量有时可提高到0.8μL以提高扩增效率。
  • 无需添加ROX染料进行反应孔间信号矫正的Real-Time PCR仪，包括：LightCycler (Roche Diagnostics)；CFX96 Real-Time PCR(Bio-Rad & MJ)；Line-Gene(Bioer，杭州博日)等。按照如下组分配制20μL PCR反应体系：
    

    成分	用量	终浓度
    2×BAPA3G SYBR qPCR Mix	10μL	1×
    正向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
    反向引物(10μM)	0.4μL	0.2μM
    DNA模板	0.5～2μL	-
    ddH2O	至20μL	-

• 设置反应程序
  进行Real-Time PCR反应，通常采用两步法，程序如下：
  

  步骤	温度	时间	循环数
  Stage 1	95℃	5min	1
  Stage 2	95℃	10s	40
  	60℃	20s
  Stage 3	Dissociation analysis

  • 使用的BAPA3G DNA聚合酶为化学修饰的热启动，必须于95℃加热5分钟才能完全恢复酶的活性，热启动步骤的时间不能缩短。
• 反应结束后确认Real-Time PCR的扩增曲线、融解曲线和标准曲线。