产品货号：
MT0196
中文名称：
BAPA HiFi PCR Mix(含染料)
英文名称：
2×BAPA HiFi PCR Mix(with dye)
产品规格：
1ml|10ml
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品中的BAPA HiFi DNA聚合酶，其来源于高保真DNA聚合酶，并加入了增强的延伸结构，使其具有超保真性能（~280倍Taq）、长片段扩增能力、高产量。长片段扩增能力，使用该酶可轻松扩增8kb的基因组DNA、20kb的λ DNA、8kb的cDNA。该酶具有6kb/min以上的延伸速度。
本制品具有5’-3’的聚合酶活性、强3’-5’的外切酶活性，产物为平末端。该制品中已经含有溴酚蓝染料，PCR扩增完毕后可直接点样于琼脂糖凝胶，无需再加入DNA Loading Buffer。
- 超保真扩增：~280倍Taq的保真性能，是载体构建、点突变、NGS模板扩增、基因合成的最佳用酶。
- 快速扩增：具有6kb/min的扩增能力。
- 长片段扩增：质粒、λDNA等简单模板可以有效扩增>20kb，基因组可以有效扩增>8kb，cDNA可以有效扩增>8kb。
| 组分 | 1mL | 10mL |
| 2×BAPA HiFi PCR Mix(with dye) | 1mL | 1mL×10 |
| 说明书 | 1份 | 1份 |
保存：长期储存置于-20℃以下，可保存2年；短期使用置于4℃（3个月）保存。
- 按下表配制反应体系并混合均匀：
成分 用量 2×BAPA HiFi PCR Mix 12.5μL 上游引物(10μM) 1μL 下游引物(10μM) 1μL 模板DNA
(目的片段≤20kb)Genomic DNA 5～250ng Plasmid DNA 0.1～10ng cDNA from RT reaction 1～2μL ddH2O 至25μL - PCR扩增循环参数
扩增片段＜5kb时采用如下程序温度 时间 循环数 95℃ 1min 1st Cycle 95℃ 30sec 25-35 Cycles 50～60℃ 30sec 72℃ 6kb/min 72℃ 2min Last Cycle
扩增片段＞5kb时采用如下程序温度 时间 循环数 92℃ 1min 1st Cycle 92℃ 30sec 25-35 Cycles 50～60℃ 30sec 72℃ 2～3kb/min 72℃ 2min Last Cycle - 电泳：1%琼脂糖凝胶电泳，上样5μL，电泳结束在紫外灯下检测条带。
- 当模板GC含量>65%时，请添加5×PCR增强剂（货号：MT0034）。
- 当扩增片段<1kb时，延伸时间可直接使用15s，当扩增片段>5kb时，按照2～3kb/min的延伸时间进行设置，能获得更高的产量。
- 由于不同的PCR管其导热性能有所不同，通常PCR采用25μL体系可以获得更高的产量。
| 无扩增或产量低 | 循环数 退火温度 模板DNA纯度和用量 延伸时间 引物用量 引物设计 | 增加循环数至35~40cycles 以2℃为单位降低退火温度 使用高纯度的模板DNA，使用合适的模板量。 适当增加延伸时间 在0.1μM～0.5μM之间选取合适的引物量 重新设计优化引物 |
| 出现杂带或Smear | 退火温度 引物浓度 循环数 模板DNA使用量 引物 | 以2℃为单位提高退火温度 降低引物浓度至0.2μM 降低循环数至25~28cycles 使用合适的模板量，不要过多使用 重新设计优化引物 |
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