产品货号:
MT0028
中文名称:
Bst2.0 DNA聚合酶
英文名称:
Bst2.0 DNA Polymerase
产品规格:
1600U|16kU
发货周期:
1~3天
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Bst2.0 DNA聚合酶来源于Bacillus stearothermophilus DNA Polymerase I,通过基因工程手段去除了其5'-3'外切酶活性,而保留了5'-3'聚合酶活性。该酶具有很强的链置换能力,因此是LAMP的绝佳用酶。与野生型Bst DNA聚合酶(大片段)相比,该酶在扩增速度、产量、耐盐性和热稳定性等方面均有大幅提高,同时,该酶可以使用dUTP作为底物进行扩增(Bst大片段无此活性)。
- DNA等温扩增;
- 富含GC结构的快速测序;
- 微量模板DNA的快速测序。
一个活力单位即在65℃条件下,30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
组分 | 1600U | 16kU |
Bst2.0 DNA聚合酶(8U/μL) | 200μL | 2×1mL |
10×Bst Buffer(Mg2+-free) | 2×1mL | 20mL |
100mM Mg2+ | 2×1mL | 20mL |
保存:-20℃,有效期3年。
- Mg2+的使用浓度为4~10mM浓度,本制品提供的Bst Buffer不含Mg2+,通常情况下,在6~8mM Mg2+条件下可获得较好的LAMP结果。
- 有文献报道加入Tte Uvrd解旋酶可改善LAMP的效果。
- 使用无模板DNA作为对照检测扩增的特异性。
图1.使用Bst 2.0 DNA聚合酶扩增DNA模板,20μL标准体系下采用0U(泳道1)、2U(泳道2)、4U(泳道3)、8U(泳道4)进行LAMP扩增。
- 按下表加入各成分配制LAMP反应液
成分 用量 Bst2.0 DNA聚合酶(8U/μL) 0.25~1μL 10×Bst Buffer(Mg2+-free) 2.5μL 100mM Mg2+ X μL dNTP Mixture (10mM each) 3.5μL 模板DNA 10ng~1μg 10×Primers 2.5μL ddH2O 至25μL - 10×Primers:16μM FIP/BIP,2μM F3/B3,4~8μM LpF/B each。
- 65℃反应30~60分钟
- 85℃加热5分钟失活。
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