产品货号:
MT0027P
中文名称:
Modi-phi29 DNA聚合酶
英文名称:
Modi-phi29 DNA Polymerase
产品规格:
1kU|10kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是phi29 DNA聚合酶的改造体,并经多次纯化分离而得。在保留了phi29 DNA聚合酶的链置换、连续合成特性(>70kb)的基础上,提高了滚环扩增的反应温度,Modi-phi29 DNA聚合酶可在42℃条件下持续的进行DNA合成(而phi29 DNA聚合酶在此温度下活性很低)。Modi-phi29仍然具有很强的3'-5'外切酶校读功能,合成的DNA片段保真性高。Modi-phi29的外切酶活性较强,因此合成过程中引物需要3'端硫代修饰,以降低外切活性对引物的切割效应。
Modi-phi29 DNA聚合酶的高温反应特性,在以下几个方面对实验有明显的提升:
- 在NGS测序中,提升了高GC含量、回文结构等复杂模板的延伸能力,使NGS的覆盖度更均一,降低测序所需深度;
- 高温的反应条件,提升了基因组DNA的WGA产物的合成量,并可以进行变温扩增;
- 降低测序中Gap区域,提升单细胞测序的数据质量和完整度;
- 降低非特异性扩增产物;
- 提升MDA/RCA等实验的扩增性能和特异性。
Modi-phi29 DNA聚合酶具有超强链置换能力、连续合成能力、扩增的高保真性等特点。
Modi-phi29 DNA聚合酶可用于DNA恒温滚环扩增,需强链置换和DNA连续合成的反应,质粒快速复制,高保真快速复制等领域。
组分 | 1kU | 10kU |
Modi-phi29 DNA聚合酶(10U/μL) | 100μL | 1mL |
10×phi29 Buffer | 1mL | 1mL×3 |
保存:-20℃,有效期2年。
- 必要时可单独额外添加终浓度1mM DTT和0.2mg/mL BSA,可提高反应效率。
- 该酶的最佳反应温度为42℃(在30~42℃之间均有活性)。
- 65℃加热10分钟即可使该酶失活。
- 根据实验类型需要,调整dNTP的浓度100~500μM。
- 添加酵母无机焦磷酸酶可提高DNA产量。
- 反应引物3'端的硫代修饰可避免引物降解。
- 配制引物模板退火体系
成分 用量 10×phi29 Buffer 2μL dNTP Mixture (10mM each) 1.2μL 模板DNA 0.1~40ng 硫代修饰的Oligo x μL ddH2O 至19μL - 在不同的实验类型中,Oligo根据实验需要自行选择。
- 引物和模板退火:体系配制完毕后,放置到PCR仪中,95℃ 3min,25℃ 3min。
- 退火完毕后,向退火产物中加入1μL Modi-phi29 DNA聚合酶,混合均匀。
- 扩增反应
- 恒温扩增:
对于环状DNA模板采用恒温反应作为推荐使用30℃恒温扩增,30℃孵育6~16h.该酶在30~42℃条件下均可工作,必要时根据实验类型进行调整。 - 变温扩增:对于基因组DNA或cDNA模板,推荐使用变温扩增反应,以在短时间内获得更高产量,并提高了低浓度模板的扩增产量。在PCR仪上做如下设置:【30℃ 5min;42℃ 15s】循环72次(约6h)或120次(约10h)。
- 恒温扩增:
- 必要时,反应结束后,可于65℃加热10min进行失活反应。
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