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本试剂盒在PolyA加尾反应的基础上采用上下游引物对miRNA进行特异性扩增，采用TaqMan探针对扩增产物进行特异性检测。与染料法qPCR相比，其检测结果更加特异，不会出现因染料非特异性嵌入、引物错配等导致的非特异性检测。DIOG miRNA探针法荧光定量PCR试剂拥有更加出色的检测灵敏度，可以检测低至1pg血浆RNA中的目标miRNA分子。基于上述，DIOG miRNA探针法荧光定量PCR试剂可以更加准确地对目标miRNA进行绝对定量和相对定量分析，检测结果更加客观，是miRNA检测、定量和学术研究的理想工具。本试剂盒可与miRNA反转录试剂盒（货号：ME0018）配套使用。

• 使用特别设计的Taqman探针，qPCR对miRNA的检测较SYBR Green染料法更加特异，可有效避免非特异扩增检测；
  
• 能够更加准确地对miRNA进行绝对定量和相对定量分析，检测结果更加客观；
  
• 配置高效的热启动Taq酶，反应体系经充分优化，PCR扩增效率高，拥有更高的检测灵敏度。

• 配制反应体系：
  取RNase-free离心管，配制如下混合液：
  

  成分	用量
  2×DIOG miRNA probe mix	10μL
  DIOG miRNA taqman mix	1.0μL
  Temlate cDNA	2～4μL
  50×ROX Reference	0.4μL
  Primer Mix	2μL
  ddH2O	至20μL

  
  注1：miRNA cDNA模板为DIOG miRNA加尾法逆转录试剂盒（货号：ME0018）的RT产物；
  注2：根据所用qPCR仪及使用者偏好，可选择用或不用ROX校正。
  
• PCR反应条件：
  

  过程	温度	时间	循环数
  激活Taq	95℃	10min	1
  PCR循环	95℃	15s	45
  	56℃	50s

• miRNA的种类众多，不同miRNA的反应条件可能不同；
  
• 百奥莱博每种miRNA的探针法和染料法qPCR试剂都已经过实验优化，研究者可放心使用；
  
• 百奥莱博是国内miRNA qPCR试剂种类最全的公司之一，研究者如有任何需要或疑问，可在公司网站线上咨询或通过电话询问相关事宜；
  
• 对于丰度较高的miRNA,cDNA样本可适当稀释后再进行qPCR；
  
• 试剂保存与操作过程中应避免强光照射，配制反应体系时，应注意防止气泡产生；
  
• 本试剂仅供科学研究之用，不得用于临床诊断。