产品货号:
M20083
中文名称:
miRNA反转录试剂盒
英文名称:
microRNA RT Mix for qPCR III(poly A)
产品规格:
10T|50T
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本试剂盒适用于miRNA加poly(A)法合成cDNA,包含了miRNA 3'末端加Poly(A)反应所需的Poly(A)聚合酶(PAP)以及反转录反应所需的原料和引物,可保证在miRNA 3'末端加Poly(A)修饰和反转录同时进行。只需设计miRNA特异性正向引物,与试剂盒中的通用反向引物配合使用即可进行后续的qPCR实验。同时,本试剂盒提供了人、大鼠、小鼠通用U6内参正向/反向引物,可用于标准曲线绘制。
反转录产物cDNA可直接用于PCR或qPCR,与2×SYBR Green qPCR预混液(货号:M20040、M20041)配合使用即可进行高性能的基因表达分析。
- 灵敏度高:检测更灵敏,可对低至10pg RNA进行检测。
- 操作简便:poly(A)加尾和cDNA合成在同一反应体系中一步完成,简化操作。
组分 | 10T | 50T |
miRNA RT Mix | 17.5μL | 87.5μL |
2×miRNA RT Buffer | 50μL | 250μL |
Universal Reverse Primer (10μM) | 800μL | 4mL |
U6 Forward Primer (10μM) | 100μL | 500μL |
U6 Reverse Primer (10μM) | 100μL | 500μL |
RNase-Free H2O | 2mL | 10mL |
保存:-20℃,避免反复冻融,有效期1年。
- 使用前,将冻存的各组分充分融解并轻轻混匀后使用。
- 本制品在配制时需避免强光照射、反复冻融。
- 请使用RNase-free实验耗材,避免不必要的损失影响实验结果。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 反转录反应体系配制
室温解冻miRNA RT Mix和2×miRNA RT Buffer并轻柔混匀,在RNase-free PCR管中,按下列组分配制RT反应液,反应液配制操作请在冰上进行。成分 用量 miRNA RT Mix 1.75μL 2×miRNA RT Buffer 5μL Total RNA X μL RNase-Free H2O 至10μL - 建议总miRNA的范围为10pg~2μg,合成的miRNA拷贝数最低可达60 copies,RNA投入总体积不超过3.25μL。
- 反转录程序设置
将上述配制的体系混合均匀后,置于PCR仪中进行反应,具体程序如下:温度 时间 备注 37℃ 50min miRNA加尾及反转录 85℃ 5s 酶失活 - 产物收集
反转录产物cDNA可立即用于后续PCR或qPCR反应,也可-20℃短期保存,若需长期保存,建议分装后置于-80℃,避免反复冻融。- 对于qPCR实验,为避免反转录体系对qPCR反应的抑制,可将反转录产物cDNA稀释10~1000倍使用。
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