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反转录酶(缺失RNase H)图片
产品货号:
M20079
中文名称:
反转录酶(缺失RNase H)
英文名称:
Reverse Transcriptase, RNase H-
产品规格:
10kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
询价

本制品是通过基因重组技术克隆表达M-MuLV的突变型的反转录酶。本酶的RNase H活性缺失,延伸能力强,可用于较长的cDNA合成,高比例的全长cDNA文库的构建以及Real-Time RT-PCR反应等。




以Poly(rA)·Oligo(dT)为模板/引物,37℃反应10min,掺入1nmol的[3H] dTTP所需的酶量定义为1个活性单位。


组分规格
Reverse Transcriptase(RNase H-,200U/μL)50μL
5×RT Buffer1mL

保存:-20℃,有效期1年。


  • 用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
  • 确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
  • 纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
  • 为保证反转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。
  • 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
  • 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴次性手套操作。



cDNA第一链合成反应体系:
  • 试剂融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
  • 按顺序加入以下反应物:
    成分用量
    模板总RNA0.1ng~5μg
    poly(A) mRNA10pg
    特异性RNA0.01pg
    引物Oligo (dT)181μL
    Random N61μL
    基因特异性引物15~20pmol
    5×RT Buffer4μL
    RNase Inhibitor(40U/μL)1μL
    dNTPs(10mM)2μL
    Reverse Transcriptase(200U/μL)1μL
    RNase-Free Water至20μL
    • 如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase-Free Water混匀后,65℃孵育5min,冰上冷却,再加入其它成分。
  • 轻轻混匀,离心。42℃孵育15~30min。如果RNA模板中不含poly A结构,25℃先孵育5min,随后42℃孵育15~30min。
    • 有实验结果提示,本反转录酶可在15min内完成1kb反转录反应。
  • 反应产物可直接用于PCR,如果不立即使用,-20℃保存少于一周,长时间保存建议-70℃放置。

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