产品货号:
M20079
中文名称:
反转录酶(缺失RNase H)
英文名称:
Reverse Transcriptase, RNase H-
产品规格:
10kU
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是通过基因重组技术克隆表达M-MuLV的突变型的反转录酶。本酶的RNase H活性缺失,延伸能力强,可用于较长的cDNA合成,高比例的全长cDNA文库的构建以及Real-Time RT-PCR反应等。
以Poly(rA)·Oligo(dT)为模板/引物,37℃反应10min,掺入1nmol的[3H] dTTP所需的酶量定义为1个活性单位。
组分 | 规格 |
Reverse Transcriptase(RNase H-,200U/μL) | 50μL |
5×RT Buffer | 1mL |
保存:-20℃,有效期1年。
- 用DEPC处理实验用到的所有实验器材,或者购买已经证明无核酸酶的实验用具,实验过程戴手套并经常更换手套,避免RNA酶的污染。
- 确保所用试剂及超纯水中无RNA酶污染。
- 纯化过的RNA必须保证不含有盐,金属离子,乙醇和苯酚,以上成分会干扰第链cDNA的合成反应。可采用乙醇沉淀RNA的方法去除掉痕量污染物。
- 为保证反转录反应的有效进行,需使用高质量的RNA模板。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴次性手套操作。
cDNA第一链合成反应体系:
- 试剂融化后,将试剂盒中各组分混匀并稍微离心后置于冰上。
- 按顺序加入以下反应物:
成分 用量 模板 总RNA 0.1ng~5μg poly(A) mRNA 10pg 特异性RNA 0.01pg 引物 Oligo (dT)18 1μL Random N6 1μL 基因特异性引物 15~20pmol 5×RT Buffer 4μL RNase Inhibitor(40U/μL) 1μL dNTPs(10mM) 2μL Reverse Transcriptase(200U/μL) 1μL RNase-Free Water 至20μL - 如果RNA模板GC含量高或者含有二级结构,可先将RNA模板和RNase-Free Water混匀后,65℃孵育5min,冰上冷却,再加入其它成分。
- 轻轻混匀,离心。42℃孵育15~30min。如果RNA模板中不含poly A结构,25℃先孵育5min,随后42℃孵育15~30min。
- 有实验结果提示,本反转录酶可在15min内完成1kb反转录反应。
- 反应产物可直接用于PCR,如果不立即使用,-20℃保存少于一周,长时间保存建议-70℃放置。
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