产品货号:
M20034
中文名称:
Bst DNA聚合酶大片段
英文名称:
Bst DNA Polymerase, Large Fragment
产品规格:
800U
发货周期:
1~3天
产品价格:
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Bst DNA聚合酶大片段是Bacillus stearothermophilus DNA聚合酶的一部分,来源于E.coli菌株,是在大肠杆菌中进行表达后经多次纯化分离而得。该酶具有5'→3'DNA聚合酶活性,但不具有5'→3'外切核酸酶活性,可应用于DNA测序、DNA标记和等温DNA扩增等。
来源 | E.coli |
反应条件 | 1×反应缓冲液,65℃温浴 |
热失活 | 80℃,20min |
65℃条件下,30min内使10nmol的dNTPs掺入酸不溶性沉淀物所需要的酶量定义为1个活性单位。
组分 | 规格 |
Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL) | 100μL |
10×Bst LF Buffer with Mg2+ | 2mL×2 |
dNTPs (10mM each) | 200μL |
保存:-20℃,有效期1年。
50mM KCl,10mM Tris-HCl (pH7.5),1mM DTT,0.1mM EDTA,0.1% Triton X-100和50% Glycerol。
10×Bst LF Buffer with Mg2+:
200mM Tris-HCl,100mM (NH4)2SO4,500mM KCl,20mM MgSO4,1% Tween 20,pH8.8。
- Bst DNA聚合酶不具有3'→5'外切酶活性。
- 长期贮存需加入100μg/mL BSA或0.1% Triton X-100。
- 建议反应温度不要超过70℃。
- 本制品仅限于专业人员的科学研究用,不得用于临床诊断或治疗,不得用于食品或药品,不得存放于普通住宅内。
- 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。
- 将10×Bst LF Buffer with Mg2+取出,冰上解冻,使用前涡旋10sec混匀,并短暂离心收集。
- 除模板DNA外,其余组分按下表顺序配制反应混合液(反应体系为25μL)。
成分 用量 终浓度 10×Bst LF Buffer 2.5μL - F3/B3 - 0.2μM FIP/BIP - 0.8μM 甜菜碱 - 1M dNTPs - 400μM M13 ssDNA模板 2μL - Bst DNA聚合酶大片段(8U/μL) 1μL - ddH2O 至25μL - - 为了防止在配制试剂时发生污染,请务必在超净工作台内进行操作;
- 试剂及模板DNA的配制操作最好在不同的区域进行,以免发生污染。
- 为了防止在配制试剂时发生污染,请务必在超净工作台内进行操作;
- 用移液器轻轻吹打混匀,并确保反应体系中无气泡,而后离心收集,过程中请勿剧烈震荡以免使酶失活。
- 用移液器吹打混匀,并短暂离心收集。
- 60~65℃恒温孵育1h。
- 如果实验需要,可以在2%的琼脂糖凝胶上进行电泳分析。
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