产品货号:
KL981202
中文名称:
2×多重探针法qPCR预混液(含UNG酶)
英文名称:
2×Multiplex Probe qPCR Mix(with UNG)
产品规格:
1mL
发货周期:
1~3天
产品价格:
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本制品是用于多重荧光探针检测的即用型qPCR试剂,可以同时对多个靶片段进行实时定量PCR分析。产品含有经过优化的缓冲液组分、热启动Taq DNA聚合酶、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有qPCR所需要的成分,用户只需加入基因组DNA或cDNA模板、引物和探针即可进行探针法qPCR反应。
- 以2×Mix提供,用户只需准备模板、引物、探针和ROX染料(取决于qPCR仪器)即可以进行探针法qPCR实验,非常方便快捷,降低了操作误差。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化,反应的灵敏度高、特异性强。灵敏度最高时可以达到50拷贝/反应(跟模板质量,引物设计等相关)。
- 既可用于TaqMan探针qPCR,也可用于分子信标探针qPCR。
- 灵敏度和专一性比染料法qPCR更高。
- UNG防污染检测系统:添加UNG(Uracil N-Glycosylase),可以有效防止因PCR产物污染造成的假阳性结果。
- 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检测。
组分 | 规格 |
2×Multiplex Probe qPCR Mix(with UNG) | 1mL |
说明书 | 1份 |
保存:-20℃,有效期1年。
本制品不冻融时保存期限为24个月。如果需要每天使用,可在4℃放置三周。
- 如果有N个样品并且做定量分析,最好设置N+7个反应,多出的7个中,6个是做标准曲线的阳性对照,一个是阴性对照(NC)。在N+7个PCR管中,加入下列成分。如果是做定性分析,则6个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照(PC),用户自己需要根据下表进行适当修改(把6个标曲反应改成1个阳性对照反应)。
成分 N个样品管 6个标准曲线管 NC管 2×多重探针法qPCR Mix 各10μL 各10μL 10μL 自备引物1(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备引物2(10μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备模板DNA 基因组DNA 10~100ng 不加 不加 cDNA 1~10ng 不加 不加 自备阳性对照模板(6个梯度) 不加 各1μL(各加1个梯度) 不加 阴性对照模板(一般用水) 不加 不加 1μL 自备探针(0.5μM) 各1μL 各1μL 1μL 自备50×ROX(如果需要) 各0.4μL 各0.4μL 0.4μL 超纯水 至20μL 至20μL 至20μL - 放入荧光PCR仪中进行扩增,下表的扩增参数仅供参考,一定需要根据靶分子长度,引物和探针的Tm值、标记染料的种类等进行调节。
- 一般选择三步法PCR:
步骤 反应参数 备注 预变性 94℃ 2min PCR循环
(35~45次)94℃ 15sec 靶分子长度最好在80~200bp 55~65℃ 15~30sec 在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定 72℃ 30sec - 如果引物Tm值接近60℃,也可以选择两步法PCR:
步骤 反应参数 备注 预变性 94℃ 2min PCR循环
(35~45次)94℃ 15sec 靶分子长度最好在80~200bp 60℃ 60sec 在此步采集荧光信号,通道根据标记染料决定
- 一般选择三步法PCR:
- 数据处理:
- 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测,只判断阳性或阴性。一般情况下,阴性对照Ct大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长,有典型扩增曲线,Ct值应该小于或等于30。对待测样品,如果其Ct大于或等于40则为阴性,如果小于或等于35则为阳性。如果在35~40之间,则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性,如果小于40,则为阳性。
- 如果把本试剂盒用于定量检测,则以阳性对照浓度的log值为横轴,以Ct值为纵轴,绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值,再推算出其浓度。
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