产品货号：
KL250210
中文名称：
探针法RT-qPCR试剂盒
英文名称：
One-Step qRT-PCR Probe Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
简要说明：
产品特点：
产品组成：
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
RNA模板、引物、TaqMan探针、超纯水。
使用方法：
相关搜索：探针法RT-qPCR试剂盒，通用型RT-PCR，探针法RT-PCR，One-Step qRT-PCR Probe Kit
本制品是基于荧光探针检测的一步法qRT-PCR试剂盒，将反转录（RT）和qPCR两个步骤合并在一个反应管中，不同于两步法要进行两次加样和反应，本制品只需要一次加样就可以完成逆转录及PCR扩增。产品含有经过优化的缓冲液组分、逆转录酶、热启动Taq DNA聚合酶、Taq DNA稳定剂、dNTPs、MgCl2和稳定剂等所有实时定量RT-PCR所需要的成分，用户只需加入RNA模板、引物和探针即可进行探针法实时定量RT-PCR反应，具有广泛的用途。
产品特点：
- 以2×Mix提供，用户只需准备模板、引物、探针和ROX染料（取决于qPCR仪器）即可以进行探针法实时定量RT-PCR实验，非常方便快捷，降低了操作误差。
- 各成分的浓度和比例都经过精心优化，反应的灵敏度高，特异性强。灵敏度最高时可以达到50拷贝/反应（跟模板质量，引物设计等相关）。
- 既可用于TaqMan探针qRT-PCR，也可以是分子信标的qRT-PCR。
- 灵敏度和专一性比染料法荧光定量RT-PCR更高。
- 可用于基因表达分析、SNP分析、拷贝数分析等实验。也可以用于定性检。
- 本制品只能用于科研，足够50次20μL体系的探针法qRT-PCR反应。
产品组成：
| 组分 | 规格 |
| 一步法探针qRT-PCR缓冲液 | 500μL |
| 一步法探针qRT-PCR酶混合液v2 | 50μL |
保存：-20℃，有效期1年。
用户自备：
RNA模板、引物、TaqMan探针、超纯水。
使用方法：
- 反应体系：如果有N个样品并且做定量分析，最好设置N+7个反应，多出的7个中，6个是做标准曲线的阳性对照，一个是阴性对照（NC）。在N+7个PCR管中，加入下列成分。如果是做定性分析，则6个做标准曲线的样品缩减成一个阳性对照（PC），用户自己需要根据下表进行适当修改（把6个标曲反应改成1个阳性对照反应）。
成分 N个样品管 6个标准曲线管 NC管 一步法探针qRT-PCR缓冲液 各10μL 10μL 10μL 一步法探针qRT-PCR酶混合液v2 1μL 1μL 1μL 自备引物1（10μM） 各0.8μL 各0.8μL 0.8μL 自备引物2（10μM） 各0.8μL 各0.8μL 0.8μL 自备探针（10μM） 各0.4μL 各0.4μL 0.4μL N个自备模板RNA 各1～2μL 不加 不加 自备阳性对照模板（6个梯度） 不加 各1μL（1管加1个梯度） 不加 阴性对照模板（水） 不加 不加 1μL 自备50×ROX I染料
或自备50×ROX II染料（见注）各0.4μL 各0.4μL 0.4μL 补超纯水到 20μL 20μL 20μL - 下列信息仅供参考，具体以qPCR仪器的使用手册为准。
- 不需要ROX的机型：AgilentMX3000和MX4000、iCycler IQ、LightCycler 480、SmartCycler System、Thermal Cycler Dice RealTime System等型号的荧光PCR仪器不需要加ROX染料，但加入的话也不会影响整个PCR分析
- 需要使用ROX I的机型：ABIPrism7000、7300、7700、7900HT、Step One、Step One Plus。
- 需要使用ROX II的机型：ABIPrism7500、7500Fast、MJ Opticon、MJ Chromo4、CorbettRotorGene3000。
- 下列信息仅供参考，具体以qPCR仪器的使用手册为准。
- 反应程序：放入荧光PCR仪中进行扩增，下表的扩增参数仅供参考，一定需要根据靶分子长度，引物和探针的Tm值、标记染料的种类等进行调节。一般选择三步法PCR：盖上盖子后上机，按下面参数进行RT-PCR：
- 两步法RT-PCR程序：
步骤 反应参数 备注 逆转录（RT步骤） 50℃ 10min 预变性 94℃ 2min PCR反应
(35～45个循环)94℃ 15sec 60℃ 45～60sec（采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA） - 三步法RT-PCR程序：
步骤 反应参数 备注 逆转录（RT步骤） 50℃ 10min 预变性 94℃ 2min PCR反应
(35～45个循环)94℃ 15sec 55～65℃ 15sec 72℃ 30sec（采集FAM通道的荧光信号，
淬灭基团为TAMRA）
- 两步法RT-PCR程序：
- 数据处理：如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性。一般情况下，阴性对照Ct大于或等于40（阈值需要以阴性对照的Ct值确定，此处为便于叙述以40为例，具体情况很可能阈值不一样）。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
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