产品货号：
KL240746
中文名称：
探针法RPA扩增试剂盒
英文名称：
Probe RPA Kit
产品规格：
48T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本制品是基于常温恒温核酸快速扩增技术开发的通用探针法RPA试剂盒。原理是利用重组酶、DNA聚合酶、单链DNA结合蛋白和引物的共同作用实现目的片段的指数级扩增，然后在核酸外切酶的作用下，加入针对靶基因序列设计的特异性分子探针，在实验条件下能够扩增并特异识别目标样木的基因片段，同时使用实时荧光检测仪可以实时监控扩增过程。
- 严格按照本说明书和基因扩增实验室的管理规范进行试验操作，避免出现实验室环境、试剂、仪器或配件污染，以及样本间交叉污染的情况，否则会容易出现假阳性结果。
- 每次使用时请取出检测所需数量的反应单元管，开盖后应当天使用，尽避免反复冻融。
- 实验结束后，检测过程中所产生的废弃物应按照相关规范进行处理。
- 在进行反应时请注意避免微量待扩增DNA的污染，建议设置空白对照以确认是否有待扩增DNA的污染。
| 组分 | 规格 |
| 探针法RPA反应缓冲液A | 1.8mL |
| 探针法RPA反应缓冲液B | 150μL |
| 探针法RPA反应缓冲液C | 35μL |
| 探针法RPA阳性对照溶液 | 50μL |
| 探针法RPA阴性对照溶液 | 100μL |
| 探针法RPA干粉反应管 | 16T×3 |
保存：-20℃，避光，避免反复冻融，有效期1年。
样品DNA，双蒸水，荧光定量PCR仪，引物。
一、样本要求
- 样本一般采用机提法和离心柱提取法所提取的血清、血浆、唾液、口腔拭子、鼻腔拭子、肛拭子、动植物组织、细胞的核酸的DNA样本。不同核酸提取方法，不用样品类型所提取的基内组DNA含量和纯度会有明品差片导致出现扩增效率不同。
二、样品DNA检验
- 单管反应体系：
成分 用量 10μM引物F 2μL 10μM引物R 2μL 10μM探针 0.6μL DNA模板+双蒸水 10μL 探针法RPA反应缓冲液A 32.9μL 探针法RPA反应缓冲液B 2.5μL - 加入32.9μL通用探针法RPA反应缓冲液A、2μL 10μM引物F、2μL 10μM引物R、0.6μL 10μM探针于装有干粉的反应单元管中；
- 再向其中加入5μL～10μL待测样术DNA和双蒸水(根据实际需求调整样本DNA和双蒸水的体积，保证二者总体积为10μL)；
- 加入2.5μL的通用探针法RPA反应缓冲液B于反应单元管盖上，盖上管盖，上下颠倒充分混匀8～10次，低速离心10秒钟；
- 将反应单元管放入荧光定量PCR仪中，每个循环周期进行一次荧光信号的采集，设定检测程序如下。
过程 温度 时间 预热 39℃ 1min 扩增（40循坏） 39℃ 30sec - 阴性/阳性照反应体系：
成分 用量 阳性/阴性对照溶液 2μL 探针法RPA反应缓冲液A 2μL 探针法RPA反应缓冲液B 0.6μL 探针法RPA反应缓冲液C 10μL 双蒸水 32.9μL
三、数据处理
- 参照具体荧光定景PCR仪使用说明书进行基线设定和阈值设定。不同荧光定量PCR仪，判定标准有所误差，可依据实际情况进行调整，如果阴性对照和阳性对照均正常，则可以进入后续分析。
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